HiMedia M1778I-500G L-лизиндекарбоксилазный солевой бульон

Сухая питательная среда HiMedia M1778I-500G L-лизиндекарбоксилазный солевой бульон — порошковая среда для микробиологического анализа с pH 6,80 ± 0,2 после стерилизации. Среда предназначена для подтверждения видов Vibrio по реакции декарбоксилирования лизина в пищевых продуктах, кормах для животных и образцах из зон производства и обращения с пищевой продукцией.

Назначение

L-лизиндекарбоксилазный солевой бульон предназначен для биохимического подтверждения Vibrio parahaemolyticus, Vibrio furnissii и Vibrio vulnificus по признаку декарбоксилирования лизина. Среда применяется при анализе пищевых продуктов, кормов для животных и образцов окружающей среды, отобранных в зонах производства и обращения с пищевой продукцией.

Состав и рабочие характеристики среды соответствуют требованиям ISO 21872-1:2017 к солевой среде для декарбоксилазы L-лизина.

Состав

Состав среды, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

pH после стерилизации при 25 °C: 6,80 ± 0,2.

Принцип измерения и интерпретация

Vibrio parahaemolyticus — галофильный эстуарный микроорганизм, который может быть выделен из различных морепродуктов и морской среды. При выделении из свежих морепродуктов микроорганизм обычно присутствует в небольшом количестве и чувствителен к охлаждению и нагреванию.

Дрожжевой экстракт обеспечивает азотистые и углеродсодержащие соединения, а также факторы роста, необходимые для развития видов Vibrio. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс и способствует росту видов Vibrio. Глюкоза (декстроза) является сбраживаемым углеводом, бромкрезоловый пурпурный — индикатором pH.

На начальных этапах инкубации микроорганизмы сбраживают глюкозу с образованием кислоты, в результате чего цвет индикатора изменяется на жёлтый. При последующей инкубации декарбоксилирование L-лизина с образованием кадаверина вызывает щелочную реакцию, и цвет индикатора изменяется на пурпурный. Сохранение жёлтого цвета указывает на отрицательную реакцию декарбоксилазы.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 19,01 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Разлейте среду примерно по 2–5 мл в узкие пробирки.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C в течение 15 мин; давление — 15 фунтов, что соответствует примерно 0,103 МПа.

Тип образца

• Пищевые продукты.
• Корма для животных.
• Образцы окружающей среды из зон производства и обращения с пищевой продукцией.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых продуктов, кормов для животных и образцов окружающей среды из зон производства и обращения с пищевой продукцией следует применять соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Методика обработки образцов по ISO 21872-1:2017

Первичное селективное обогащение

Внесите 25 г или 25 мл исследуемой порции в 225 мл щелочной солевой пептонной воды (ASPW).

Температура инкубации зависит от целевого вида Vibrio и состояния продукта, например глубокозамороженного или свежего:

• для Vibrio parahaemolyticus и Vibrio furnissii — 41,5 ± 1 °C для свежих продуктов;
• для Vibrio parahaemolyticus и Vibrio furnissii — 37 ± 1 °C для глубокозамороженных, высушенных или солёных продуктов;
• для Vibrio vulnificus — 37 ± 1 °C независимо от состояния продукта.

Продолжительность инкубации: 6 ч ± 1 ч.

Вторичное селективное обогащение

Перенесите 1 мл культуры из первичной обогатительной среды в 10 мл ASPW. Перед отбором аликвоты образец не перемешивайте.

Инкубируйте ASPW при 41,5 °C ± 1 °C и/или 37 °C ± 1 °C в течение 18 ч ± 1 ч.

Выделение и идентификация

Перенесите культуры, полученные в ASPW, на агар с тиосульфатом, цитратом, желчными солями и сахарозой (TCBS), M189.

Инкубируйте при 37 °C ± 1 °C в течение 24 ч ± 3 ч для формирования хорошо изолированных колоний.

На второй селективной среде исследуйте наличие колоний, которые по своим характеристикам могут рассматриваться как предполагаемые изоляты Vibrio parahaemolyticus, Vibrio vulnificus и/или Vibrio furnissii.

Подтверждение

Подтверждение проводят молекулярным методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и/или биохимическими методами.

Для биохимического исследования:

1. Инокулируйте отобранные колонии на поверхность чашек с солевым питательным агаром M2086I.
2. Инкубируйте при 37 °C ± 1 °C в течение 24 ч ± 3 ч.
3. Из полученных изолированных колоний выполните посев в лизиндекарбоксилазный солевой бульон M1778I.
4. Инкубируйте при 37 °C ± 1 °C в течение 24 ч ± 3 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или зеленовато-жёлтый однородный сыпучий порошок без комков.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках образуется прозрачный раствор пурпурного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора концентрацией 1,9 % масс./об. после стерилизации при 25 °C:

pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 37 °C ± 1 °C в течение 24 ± 4 ч. Инокулированные пробирки покрывают слоем стерильного минерального масла.

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения применения

1. Среда предназначена для исследования гидролиза аргинина у видов Vibrio.
2. Среда может быть непригодна для выявления гидролиза аргинина у других видов.
3. Для полного различения перечис