HiMedia M1778I-500G L-лизиндекарбоксилазный солевой бульон

Сухая питательная среда HiMedia M1778I-500G L-лизиндекарбоксилазный солевой бульон (LDC) для подтверждения видов Vibrio на основании декарбоксилирования лизина. Применяется для анализа пищевых продуктов, кормов для животных и проб окружающей среды в зонах производства и переработки продуктов питания; состав и характеристики соответствуют стандарту ISO 21872-1:2017.

Принцип измерения

Среда предназначена для биохимической идентификации Vibrio parahaemolyticus, Vibrio furnissii и Vibrio vulnificus. Экстракт дрожжей обеспечивает азот, углерод и факторы роста, необходимые для развития видов Vibrio. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс. Глюкоза (декстроза) служит ферментируемым углеводом, а бромкрезоловый пурпурный выступает в роли pH-индикатора.

На начальных этапах инкубации ферментация глюкозы приводит к образованию кислоты, из-за чего индикатор меняет цвет на жёлтый. При дальнейшем инкубировании, если L-лизин декарбоксилируется до кадаверина, возникает щелочная реакция, и цвет индикатора меняется на пурпурный. Если среда остаётся жёлтой, реакция декарбоксилазы считается отрицательной.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Растворить 19,01 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагреть до полного растворения компонентов.
3. Разлить среду в узкие пробирки объёмом примерно 2–5 мл.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.

Процедура анализа по ISO 21872-1:2017

1. Первичное селективное обогащение: 25 г или 25 мл пробы помещают в 225 мл щелочного пептонного бульона (ASPW). Температура инкубации зависит от целевого вида Vibrio и состояния продукта (свежий или глубоко замороженный) в течение 6 $\pm$ 1 ч.
2. Вторичное селективное обогащение: 1 мл культуры из первичного бульона (без перемешивания пробы) переносят в 10 мл ASPW. Инкубируют при 41,5 $\pm$ 1 °C и/или 37 $\pm$ 1 °C в течение 18 $\pm$ 1 ч.
3. Изоляция и идентификация: Культуры из ASPW переносят на агар TCBS (M189), инкубируют при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч до появления изолированных колоний.
4. Подтверждение: Колонии инокулируют на поверхность пластин с солевым питательным агаром (M2086I), инкубируют при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч. Изолированные колонии затем инокулируют в L-лизиндекарбоксилазный солевой бульон (M1778I) и инкубируют при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч.

Технические характеристики

Состав (ISO 21872-1), г/л:

• pH после стерилизации (при 25 °C): 6,80 $\pm$ 0,2
• Внешний вид: светло-жёлтый или зеленовато-жёлтый однородный свободно текущий порошок
• Цвет и прозрачность готовой среды: пурпурный прозрачный раствор в пробирках
• Реакция 1,9% водного раствора после стерилизации (при 25 °C): pH 6,60–7,00

Дополнительные параметры:

Контроль качества

Культуральные характеристики наблюдаются после инкубации при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 4 ч (пробирки с посевом перекрывают стерильным минеральным маслом).

Ограничения применения

1. Среда подходит для определения гидролиза аргинина у видов Vibrio.
2. Может быть непригодна для обнаружения гидролиза аргинина у других видов.
3. Для полного дифференцирования данных видов между собой и от непатогенных Vibrio spp. требуются дополнительные фенотипические тесты.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

При работе с образцами и культурами следует соблюдать правила надлежащей микробиологической лабораторной практики. Использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица. Загрязнённые материалы перед утилизацией должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации.