HiMedia M1644I-500G Аргининдигидролазный солевой бульон

Сухая питательная среда HiMedia M1644I-500G Аргининдигидролазный солевой бульон содержит 19,01 г сухой среды на 1 л приготовленного раствора. Применяется для подтверждения видов Vibrio в пищевых продуктах, кормах и образцах производственной среды; реакция аргининдигидролазы протекает строго анаэробно и требует покрытия бульона стерильным минеральным маслом.

Назначение

Аргининдигидролазный солевой бульон M1644I предназначен для биохимического подтверждения видов Vibrio при исследовании пищевых продуктов, кормов для животных и образцов окружающей среды в сфере производства и обращения пищевой продукции.

Состав и рабочие характеристики среды соответствуют составу, установленному ISO 21872-1:2017.

Тип изделия: бульон
Форма: порошок
Масса: 500 г
Происхождение компонентов: без компонентов животного происхождения, микробное
Тип продукта: стандартный
Тип упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности)

Состав

Формула аргининдигидролазной солевой среды (ADH) по ISO 21872-1:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Конечный pH после стерилизации при 25 °C: 6,8 ± 0,2.

Принцип измерения и интерпретация

Аргининдигидролазный солевой бульон применяется для подтверждения видов Vibrio в соответствии с требованиями ISO. Дифференциация бактерий основана на способности декарбоксилировать аминокислоты.

Бактерии, продуцирующие фермент аргининдигидролазу, декарбоксилируют аргинин с образованием путресцина. Образующийся амин повышает pH среды. Изменение pH выявляется индикатором бромкрезоловым пурпурным, который приобретает пурпурную окраску в щелочной среде.

Переход окраски из пурпурной в жёлтую с последующим возвращением в пурпурную рассматривается как положительная реакция гидролиза аргинина. Жёлтая окраска связана с утилизацией декстрозы, а последующее возвращение к пурпурной — с образованием щелочных продуктов реакции аргининдигидролазы.

Дрожжевой экстракт обеспечивает микроорганизмы необходимыми питательными веществами, L-аргинин стимулирует синтез аргининдигидролазы, глюкоза служит источником энергии. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс и рост видов Vibrio.

Реакция аргинина протекает строго анаэробно, поэтому пробирки с бульоном необходимо покрывать минеральным маслом. При дифференциации видов Vibrio используют контрольные пробирки без аргинина. Если в контрольной пробирке появляется пурпурная окраска, реакцию считают отрицательной.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 19,01 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте смесь для полного растворения среды.
3. Распределите приготовленную среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (ориентировочно 0,103 МПа, 1,03 бар) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки в вертикальном положении.

Методика исследования по ISO 21872-1:2017

Первичное селективное обогащение

Внесите 25 г или 25 мл исследуемой порции в 225 мл щелочной пептонной воды с солью (ASPW).

Температура зависит от целевого вида Vibrio и состояния продукта, включая глубокую заморозку или свежесть:

• для V. parahaemolyticus и V. cholerae: 41,5 ± 1 °C для свежих продуктов и 37 ± 1 °C для глубоко замороженных, сушёных или солёных продуктов;
• для V. vulnificus: 37 ± 1 °C для продуктов любого состояния.

Продолжительность первичного обогащения: 6 ч ± 1 ч.

Вторичное селективное обогащение

Перенесите 1 мл культуры из первичного обогатительного бульона в 10 мл ASPW. Перед отбором аликвоты образец не перемешивайте.

Инкубируйте ASPW при 41,5 °C ± 1 °C и/или 37 °C ± 1 °C в течение 18 ч ± 1 ч.

Выделение и идентификация

Перенесите культуры, полученные в ASPW, на тиосульфат-цитрат-жёлчный сахарозный агар (TCBS), среду M189.

Инкубируйте при 37 °C ± 1 °C в течение 24 ч ± 3 ч для формирования хорошо изолированных колоний.

На второй селективной среде исследуйте наличие колоний, которые по своим характеристикам могут быть отнесены к возможным изолятам V. parahaemolyticus, V. vulnificus и/или V. cholerae.

Подтверждение

Подтверждение выполняют молекулярными методами — полимеразной цепной реакцией (ПЦР) — и/или биохимическими методами.

Для биохимического исследования выбранные колонии инокулируйте на поверхность чашек с солевым питательным агаром (Saline Nutrient Agar), среда M2086I.

Инкубируйте при 37 °C ± 1 °C в течение 24 ч ± 3 ч. Из полученных изолированных колоний выполняют посев в аргининдигидролазный солевой бульон M1644I и инкубируют при 37 °C ± 1 °C в течение 24 ч ± 3 ч.

Тип образцов

• пищевые продукты;
• корма для животных;
• образцы окружающей среды в сфере производства и обращения пищевой продукции.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых продуктов, кормов для животных и образцов окружающей среды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно действующим руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Среда предназначена для гидролиза аргинина видами Vibrio.
2. Среда может быть непригодна для выявления гидролиза аргинина у других видов.
3. Для полного различения этих видов между собой и с непатогенными видами Vibrio требуются дополнительные фенотипические тесты.

Контроль качества

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованных условиях.

Внешний вид

Светло-жёлтый или серый однородный сыпучий порошок без комков.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Прозрачный раствор пурпурного цвета в пробирках.

Реакция и pH

Реакция 1,9 % масс./об. водного раствора при 25 °C: pH 6,8 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч с покрытием приблизительно 1 мл стерильного мин