HiMedia M1644I-500G Аргининдигидролазный солевой бульон

Сухая питательная среда HiMedia M1644I-500G Аргининдигидролазный солевой бульон, разработанная в соответствии со стандартом ISO 21872-1:2017. Применяется для подтверждения видов Vibrio в образцах пищевых продуктов, кормов для животных и проб окружающей среды в зонах производства и переработки продуктов питания.

Принцип измерения

Аргининдигидролазный солевой бульон используется для дифференциации бактерий на основе их способности декарбоксилировать аминокислоты. Бактерии, вырабатывающие фермент аргининдигидролазу, декарбоксилируют аргинин до путресцина. Образование амина (путресцина) повышает pH среды, что фиксируется индикатором бромкрезоловым пурпурным, который в щелочной среде приобретает фиолетовый цвет.

Положительной реакцией (гидролиз аргинина) считается изменение цвета с фиолетового на жёлтый (вследствие утилизации глюкозы) и последующий возврат к фиолетовому цвету.

Роль компонентов:

• Экстракт дрожжей: обеспечивает необходимые питательные вещества.
• L-аргинин: стимулирует синтез аргининдигидролазы.
• Глюкоза: служит источником энергии.
• Хлорид натрия: поддерживает осмотический баланс и способствует росту видов Vibrio.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Растворить 19,01 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагреть для полного растворения компонентов.
3. Разлить среду по пробиркам.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
5. Охладить пробирки в вертикальном положении.

Процедура подтверждения (согласно ISO 21872-1:2017)

1. Первичное селективное обогащение: 25 г или 25 мл пробы помещают в 225 мл щелочной солевой пептонной воды (ASPW). Инкубация в течение 6 $\pm$ 1 ч. Температура зависит от целевого вида Vibrio и состояния продукта:
   • V. parahaemolyticus и V. cholerae: 41,5 $\pm$ 1 °C (свежие продукты) или 37 $\pm$ 1 °C (замороженные, сушёные или солёные продукты).
   • V. vulnificus: 37 $\pm$ 1 °C для всех типов продуктов.
2. Вторичное селективное обогащение: 1 мл культуры из первичного бульона переносят в 10 мл ASPW (без перемешивания пробы перед отбором). Инкубируют при 41,5 $\pm$ 1 °C и/или 37 $\pm$ 1 °C в течение 18 $\pm$ 1 ч.
3. Изоляция и идентификация: Культуры из ASPW переносят на агар TCBS (M189), инкубируют при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч для получения изолированных колоний.
4. Подтверждение: Выбранные колонии инокулируют на поверхность пластин солевого питательного агара (M2086I), инкубируют при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч. Изолированные колонии переносят в аргининдигидролазный солевой бульон (M1644I) и инкубируют при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч.

Важные условия:

• Реакция на аргинин протекает строго анаэробно, поэтому поверхность бульона в пробирках должна быть покрыта слоем стерильного минерального масла (около 1 мл).
• Для дифференциации видов Vibrio обязательно использование контрольных пробирок без аргинина. Если в контрольной пробирке наблюдается фиолетовая реакция, тест считается отрицательным.

Технические характеристики

Состав (согласно спецификации ISO 21872-1 — ADH), г/л:

• Конечный pH после стерилизации (при 25 °C): 6,8 $\pm$ 0,2.

Общие параметры

Культуральные характеристики

Определение L-аргининдигидролазы: инкубация при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч с созданием слоя стерильного минерального масла.

Область применения и ограничения

Среда предназначена для подтверждения гидролиза аргинина у видов Vibrio. Ограничения:

• Может быть непригодна для обнаружения гидролиза аргинина у других видов бактерий.
• Для полного разграничения данных видов между собой и от непатогенных Vibrio spp. требуются дополнительные фенотипические тесты.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия плотно закрывать крышку во избежание образования комков.
• Утилизация: загрязнённые материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.