HiMedia M1644I-100G Аргининдигидролазный солевой бульон

Сухая питательная среда HiMedia M1644I-100G Аргининдигидролазный солевой бульон, разработанная в соответствии со стандартом ISO 21872-1:2017. Применяется для подтверждения видов Vibrio в образцах пищевых продуктов, кормов для животных и проб из окружающей среды в зонах производства и переработки пищевой продукции.

Принцип измерения

Среда используется для определения активности фермента аргининдигидролазы. Бактерии, вырабатывающие этот фермент, декарбоксилируют аргинин с образованием путресцина. Появление амина (путресцина) повышает pH среды, что фиксируется индикатором бромкрезоловым пурпурным, который в щелочной среде приобретает фиолетовый цвет.

Положительной реакцией (гидролиз аргинина) считается изменение цвета с фиолетового на жёлтый (вследствие утилизации глюкозы) и последующий возврат к фиолетовому цвету.

Роль компонентов:

• Экстракт дрожжей: источник необходимых питательных веществ.
• L-аргинин: стимулирует синтез аргининдигидролазы.
• Глюкоза: источник энергии.
• Хлорид натрия: поддерживает осмотический баланс и способствует росту видов Vibrio.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Растворить 19,01 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагреть до полного растворения компонентов.
3. Разлить по пробиркам.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
5. Охладить пробирки в вертикальном положении.

Процедура анализа по ISO 21872-1:2017

1. Первичное селективное обогащение: 25 г или 25 мл исследуемой порции помещают в 225 мл щелочной солевой пептонной воды (ASPW). Время инкубации — 6 $\pm$ 1 ч. Температура зависит от целевого вида Vibrio и состояния продукта:
   • V. parahaemolyticus и V. cholerae: 41,5 $\pm$ 1 °C (свежие продукты) или 37 $\pm$ 1 °C (замороженные, сухие или солёные продукты).
   • V. vulnificus: 37 $\pm$ 1 °C для всех типов продуктов.
2. Вторичное селективное обогащение: 1 мл культуры из первичного бульона переносят в 10 мл ASPW (без предварительного перемешивания пробы). Инкубируют при 41,5 $\pm$ 1 °C и/или 37 $\pm$ 1 °C в течение 18 $\pm$ 1 ч.
3. Изоляция и идентификация: Культуры из ASPW высевают на агар TCBS (M189), инкубируют при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч до получения изолированных колоний.
4. Подтверждение: Подозрительные колонии высевают на солевой питательный агар (M2086I), инкубируют при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч. Изолированные колонии инокулируют в аргининдигидролазный солевой бульон (M1644I) и инкубируют при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч.

Важные условия:

• Реакция на аргинин протекает строго анаэробно, поэтому поверхность бульона в пробирках должна быть покрыта стерильным минеральным маслом (около 1 мл).
• Необходимо использовать контрольные пробирки без аргинина. Если в контрольной пробирке наблюдается фиолетовая реакция, основной тест считается отрицательным.

Технические характеристики

Состав (согласно ISO 21872-1)

• Конечный pH после стерилизации (при 25 °C): 6,8 $\pm$ 0,2.

Общие параметры

• Вес: 100 г.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от светло-жёлтого до серого цвета.
• Цвет и прозрачность готовой среды: прозрачный раствор фиолетового цвета.
• pH (1,9% водный раствор при 25 °C): 6,60–7,00 (номинал 6,8 $\pm$ 0,2).

Культуральные характеристики

Инкубация при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч с созданием масляного слоя (1 мл стерильного минерального масла).

Ограничения применения

1. Среда предназначена специально для определения гидролиза аргинина видами Vibrio.
2. Может быть непригодна для обнаружения гидролиза аргинина у других видов бактерий.
3. Для полного дифференцирования данных видов между собой и от непатогенных Vibrio spp. требуются дополнительные фенотипические тесты.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере. Из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Утилизация: загрязнённые материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.