HiMedia M1644I-100G Аргининдигидролазный солевой бульон

Питательная микробиологическая среда HiMedia M1644I-100G Аргининдигидролазный солевой бульон представляет собой сухой порошок для приготовления жидкой среды. Среда предназначена для подтверждения видов Vibrio в пищевых продуктах, кормах для животных и образцах окружающей среды; аргининовая реакция протекает строго анаэробно и требует перекрытия бульона стерильным минеральным маслом.

Назначение

Аргининдигидролазный солевой бульон применяется как одна из сред для подтверждения видов Vibrio в пищевых продуктах, кормах для животных и образцах окружающей среды на предприятиях пищевого производства и в сфере обращения с пищевой продукцией.

Состав и рабочие характеристики среды соответствуют составу, установленному ISO 21872-1:2017 для аргининдигидролазной солевой среды (ADH).

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик.

Технические характеристики

• Назначение изделия: бульон
• Физическая форма: порошок
• Масса: 100 г
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности)
• Происхождение: без компонентов животного происхождения, микробиологическое
• Конечный pH после стерилизации при 25 °C: 6,8 ± 0,2
• pH: 6,60–7,00
• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C

Принцип измерения и интерпретация реакции

Аргининдигидролазный солевой бульон используется для подтверждения видов Vibrio в соответствии с требованиями ISO. Дифференциация бактерий основана на их способности декарбоксилировать аминокислоты.

Декарбоксилазные среды для выявления аргининдигидролазы, а также лизиндекарбоксилазы и орнитиндекарбоксилазы были впервые предложены Мёллером. Бактерии, продуцирующие фермент аргининдигидролазу в данной среде, декарбоксилируют аргинин с образованием путресцина.

Образование путресцина повышает pH среды. Изменение pH выявляется индикатором бромкрезоловым пурпурным, который приобретает фиолетовую окраску в щелочной среде. Положительной реакцией на гидролиз аргинина считается изменение окраски с фиолетовой на жёлтую вследствие утилизации декстрозы с последующим возвратом окраски к фиолетовой.

• Дрожжевой экстракт обеспечивает микроорганизмы необходимыми питательными веществами.
• L-аргинин стимулирует синтез аргининдигидролазы.
• Глюкоза служит источником энергии.
• Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс и способствует росту видов Vibrio.

Аргининовая реакция протекает строго в анаэробных условиях, поэтому пробирки с бульоном необходимо покрывать слоем минерального масла. При дифференциации видов Vibrio используют контрольные пробирки без аргинина. Если в контрольной пробирке появляется фиолетовая реакция, результат считают отрицательным.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 19,01 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Разлейте среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки в вертикальном положении.

Пробоподготовка и последовательность анализа по ISO 21872-1:2017

Первичное селективное обогащение

Внесите 25 г или 25 мл исследуемой порции в 225 мл щелочной солевой пептонной воды (ASPW).

Температура инкубации зависит от целевого вида Vibrio и состояния продукта, включая глубокую заморозку или свежесть. Инкубируйте в течение 6 ч ± 1 ч:

• для V. parahaemolyticus и V. cholerae: при 41,5 ± 1 °C для свежих продуктов;
• для V. parahaemolyticus и V. cholerae: при 37 ± 1 °C для глубоко замороженных, высушенных или солёных продуктов;
• для V. vulnificus: при 37 ± 1 °C независимо от состояния продукта.

Вторичное селективное обогащение

1. Перенесите 1 мл культуры из первичного обогатительного бульона в 10 мл щелочной солевой пептонной воды (ASPW). Перед отбором аликвоты образец не перемешивайте.
2. Инкубируйте ASPW при 41,5 °C ± 1 °C и/или 37 °C ± 1 °C в течение 18 ч ± 1 ч.

Выделение и идентификация

1. Перенесите культуры, полученные в ASPW, на агар с тиосульфатом, цитратом, желчными солями и сахарозой (TCBS Agar, M189).
2. Инкубируйте при 37 °C ± 1 °C в течение 24 ч ± 3 ч для получения хорошо изолированных колоний.
3. Во второй селективной среде исследуйте наличие колоний, которые по своим характеристикам могут рассматриваться как предполагаемые изоляты V. parahaemolyticus, V. vulnificus и/или V. cholerae.

Подтверждение

Подтверждение проводят молекулярными методами, включая ПЦР, и/или биохимическими методами.

Для биохимического исследования:

1. Пересевайте выбранные колонии на поверхность чашек с солевым питательным агаром (Saline Nutrient Agar, M2086I).
2. Инкубируйте при 37 °C ± 1 °C в течение 24 ч ± 3 ч.
3. Из полученных изолированных колоний выполните посев в аргининдигидролазный солевой бульон M1644I.
4. Инкубируйте при 37 °C ± 1 °C в течение 24 ч ± 3 ч.

Первичное обогащение образца перед высевом проводят в щелочной солевой пептонной воде. После этого обогащённую среду высевают на агар TCBS, типичные колонии пересевают на солевой питательный агар, а затем подтверждают биохимическими тестами, одним из которых является аргининдигидролазный солевой бульон M1644I.

Типы исследуемых образцов

• Пищевые продукты
• Корма для животных
• Образцы окружающей среды, отобранные на предприятиях пищевого производства и в сфере обращения с пищевой продукцией

Отбор и обработка образцов

Для пищевых продуктов, кормов для животных и образцов окружающей среды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или серый однородный сыпучий порошок.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Прозрачный раствор фиолетового цвета в пробирках.

Реакция среды

Реакцию определяют для водного раствора концентрацией 1,9 % мас./об. при 25 °C.

• pH: 6,8 ± 0,2
• Ди