HiMedia M148I-100G Ацетамидный бульон (Twin Pack)

Питательная микробиологическая среда HiMedia M148I-100G Ацетамидный бульон (Twin Pack) — сухой химически определённый порошковый бульон для подтверждения неферментирующих грамотрицательных бактерий. Применяется прежде всего для подтверждения Pseudomonas aeruginosa в пробах воды; сухой препарат хранят в плотно закрытой таре при температуре ниже 30 °C, а приготовленную среду — при 2–8 °C.

Назначение

Ацетамидный бульон предназначен для подтверждения неферментирующих грамотрицательных бактерий, особенно Pseudomonas aeruginosa.

Состав

Содержание компонентов приведено в граммах на литр.

Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,5.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности среды.

Принцип действия и интерпретация

Различные патогенные микроорганизмы могут передаваться человеку через природные пресные и морские рекреационные воды, загрязнённые сточными водами. Pseudomonas aeruginosa относится к микроорганизмам, способным расти в воде при очень низкой концентрации питательных веществ.

Основными индикаторами качества воды являются Escherichia coli и Enterococci. Определение количества Pseudomonas aeruginosa в рекреационных водах может быть полезно при сбросе в водоприёмники отходов целлюлозно-бумажного производства и стоков предприятий текстильной отделки.

Одно из характерных свойств Pseudomonas aeruginosa — способность образовывать аммиак из ацетамида.

Ацетамидный бульон, сформулированный в соответствии с проектом prEN 12780:1999, применяют для подтверждения наличия неферментирующих грамотрицательных бактерий Pseudomonas aeruginosa. Микроорганизмы, растущие в этой среде, метаболизируют ацетамид посредством дезаминирования, связанного с активностью акриламидазы. Такая способность характерна для Ps. aeruginosa, Ps. acidovorans группы III (Achromobacter xylosoxidans) и Alcaligens odorans.

Ацетамид в составе среды служит единственным источником азота и углерода. Сульфат магния, молибдат натрия и сульфат железа являются источниками ионов, стимулирующих метаболизм. Фосфат выполняет функцию буферного компонента.

Методика проведения анализа

1. Пробы воды фильтруют через стерильные мембранные фильтры из эфира целлюлозы.
2. Мембранные фильтры асептически помещают на основу агара для выявления псевдомонад M085, содержащую добавку Cetrinix FD029.
3. Чашки с фильтрами инкубируют при 35–37 °C в течение 24–48 ч.
4. Подсчитывают колонии, продуцирующие пиоцианин, как подтверждённые Pseudomonas aeruginosa.
5. Непродуцирующие пиоцианин флуоресцирующие колонии подсчитывают как предположительно относящиеся к Pseudomonas aeruginosa.
6. Предположительно положительные колонии подтверждают с использованием ацетамидного бульона M148I.
7. Образование аммиака из ацетамида выявляют добавлением реактива Несслера R010.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 1,4 г части B в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Добавьте 2 г части A.
3. При необходимости нагрейте для полного растворения среды.
4. Разлейте среду по пробиркам или в требуемую лабораторную посуду.
5. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 psi, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.

Контроль качества

Внешний вид

• Часть A: бесцветные гигроскопичные кристаллы.
• Часть B: однородный сыпучий порошок от кремового до белого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Бесцветный прозрачный раствор.

Реакция среды

• Реакция полной среды, приготовленной из смеси 0,2 % масс./об. части A и 0,14 % масс./об. части B, при 25 °C.
• pH: 7,0 ± 0,5.

Диапазон pH

• pH: 6,50–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

Хранение и срок годности

• Условия хранения сухого препарата: в плотно закрытой таре при температуре ниже 30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Техническое отличие методики

В качестве единственного источника азота и углерода среда использует ацетамид, а подтверждение образования аммиака выполняют цветной реакцией с реактивом Несслера R010