Питательная микробиологическая среда HiMedia M127-100G EC бульон производства HiMedia для селективного количественного определения предполагаемых Escherichia coli методом наиболее вероятного числа (MPN). Применяется при анализе проб воды и пищевых продуктов, включая молоко и молочные продукты, с инкубацией при 37 °C, 44,5 °C или 45,5 °C в зависимости от задачи.

Назначение

EC-бульон предназначен для выявления колиформных бактерий при бактериологическом исследовании воды, молока и пищевых продуктов, а также для подтверждающего определения Escherichia coli и количественной оценки фекальных колиформных организмов методом наиболее вероятного числа (MPN).

Среда используется:

• при селективном количественном определении предполагаемых Escherichia coli из проб воды и пищевых продуктов;
• для подтверждения наличия колиформных бактерий;
• для дифференциации источника колиформной группы — фекального или нефекального — при использовании в подтверждающем тесте;
• для выявления колиформных организмов при 37 °C;
• для выделения Escherichia coli из воды и моллюсков при 44,5 °C;
• для анализа пищевых продуктов при 45,5 °C.

EC-бульон не следует использовать для прямого выделения колиформных бактерий: для оптимального восстановления фекальных колиформ требуется предварительное обогащение в предварительной селективной среде.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Принцип действия и интерпретация

EC-среда изначально была описана Hajna и Perry, позднее Fishbein и Surkiewicz применили её для подтверждающих тестов на Escherichia coli. Среда также используется в методах MPN и часто применяется для подтверждения присутствия колиформных бактерий.

Компоненты среды выполняют следующие функции:

• триптон обеспечивает азотистые и углеродистые соединения, аминокислоты с длинной цепью и другие необходимые питательные вещества;
• лактоза является ферментируемым сахаром;
• смесь желчных солей ингибирует грамположительные бактерии, особенно бациллы и фекальные стрептококки;
• фосфаты контролируют pH в процессе ферментации лактозы.

Образование газа в ферментационной трубке в течение 24 ч или менее является предположительным признаком присутствия колиформных бактерий.

Интерпретация по температуре и образованию газа:

• образование газа при 44,5 °C или 45,5 °C, а также при 37 °C указывает на наличие Escherichia coli и, возможно, других колиформных бактерий;
• образование газа при 37 °C указывает на наличие колиформных бактерий без Escherichia coli.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 37,0 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагревайте суспензию до полного растворения среды.
3. Разлейте приготовленную среду в пробирки, содержащие перевёрнутые трубки Дюргема.
4. Стерилизуйте в автоклаве при 121 °C в течение 15 мин при давлении около 0,10 МПа (15 фунтов давления).
5. При необходимости скорректируйте концентрацию среды в соответствии с объёмом исследуемой пробы.

При использовании пробы объёмом более 10 мл среду необходимо восстанавливать в концентрации, эквивалентной указанной в инструкции, с учётом последующего добавления пробы.

Методика подтверждающего анализа

1. Перенесите петлёй культуру из всех пробирок с лаурилсульфатным бульоном M080, в которых образование газа произошло в течение 24 ч.
2. Перенесите также культуру из всех пробирок, в которых бактериальный рост наблюдался в течение 48 ч, в пробирки с EC-бульоном.
3. Не позднее чем через 30 мин после внесения посевного материала поместите пробирки в водяную баню.
4. Инкубируйте пробирки при 44 °C в течение 24 ч.
5. Рост с образованием газа считайте положительной реакцией.
6. Рассчитайте плотность фекальных колиформных организмов с использованием таблиц MPN.

Ложноотрицательные реакции при выделении колиформных бактерий из систем водоснабжения могут возникать вследствие низкого pH, охлаждения, а также применения бактерицидных или бактериостатических средств.

Тип исследуемых проб

• Пищевые продукты.
• Вода.

Отбор и обращение с пробами

Для проб пищевых продуктов и молочных продуктов используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим руководствам.

Для проб воды используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам и местным нормативным требованиям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения метода

1. Для идентификации микроорганизмы должны находиться в чистой культуре.
2. Для окончательной идентификации следует проводить морфологические, биохимические и/или серологические тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный, сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: жёлтый прозрачный раствор без осадка.

Реакция среды

Реакция: водный раствор с концентрацией 3,7 % масс./об. при 25 °C.

pH: 6,9 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 44,5 °C ± 0,2 в течение 24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее известен как Enterobacter aerogenes.

** Ранее известен как Bacillus subtilis subsp. spizizenii.

Условия хранения и срок годности

Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.

Температура хранения приготовленной среды: 15–30 °C.

Храните продукт в плотно закрытой ёмкости. После вскрытия необходимо плотно закрыть флакон и хранить продукт в сухом состоянии, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к комкованию.

Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывайте ёмкость.

Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке. Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение установленного срока годности и при соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Меры предосторожности

Перед вскрытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.

При работе используйте:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при обращении с пробами и культурами. При работе с материалами необходимо соблюдать стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами. Требования безопасности следует уточнять в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

Следуйте установленным лабораторным процедурам утилизации инфекционных материалов. Материалы, контактировавшие с пробами, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Технические характеристики

Сравнительный контекст

В отличие от универсальных питательных бульонов, EC-бульон содержит лактозу и смесь желчных солей, благодаря чему используется для селективного выявления колиформных бактерий и подтверждающего определения Escherichia coli по образованию газа при заданной температуре инкубации.