Бульон Ханахана (среда SOB) для рекомбинантных E.coli HiMedia M1252-500G (уп/500 гр)

Сухая питательная среда Бульон Ханахана (среда SOB) для рекомбинантных E. coli HiMedia M1252-500G. Рекомендуется для культивирования рекомбинантных штаммов Escherichia coli; поставляется в упаковке 500 г.

Принцип действия и интерпретация

Трансформация представляет собой процесс поглощения клеткой чужеродного генетического материала, что в результате рекомбинации приводит к генетическому изменению клетки. Способность бактерии поглощать экзогенную ДНК из внешней среды называется компетентностью. Важную роль в этом процессе играет проницаемость мембраны, позволяющая чужеродной ДНК проникнуть в клетку-реципиент.

Бактерии, подвергшиеся трансформации, требуют культивирования на богатой изотонической среде для восстановления после процесса трансформации (заживления перфораций в мембране) и последующей репликации. Бульон Ханахана (Hanahan's Broth) специально разработан для культивирования таких рекомбинантных штаммов Escherichia coli.

Среда используется для подготовки и трансформации компетентных клеток. Для генерации компетентных клеток бактерии выращивают в бульоне Ханахана до достижения необходимой мутности, после чего подвергают стандартным процедурам, таким как электропорация или обработка CaCl₂ в охлажденных условиях. Для выживания таких перфорированных компетентных клеток необходима богатая изотоническая среда. На финальном этапе трансформации используется бульон Ханахана с добавлением 0,4 % декстрозы, которая служит источником углерода и энергии для восстановления мембран и репликации.

Роль компонентов среды:

• Триптон и дрожжевой экстракт: обеспечивают рекомбинантные E. coli азотистыми соединениями и факторами роста.
• Хлорид калия и хлорид натрия: поддерживают изотонические условия.
• Сульфат магния: необходимый компонент для репликации ДНК.

Состав

Состав, г/л:

Конечный pH (при 25 °C): 7,0 ± 0,2.

Методика приготовления и стерилизации

1. Растворить 28,08 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагреть для полного растворения среды.
3. Разлить по пробиркам.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа) в течение 15 минут.

Область применения

Среда предназначена для работы с изолированными рекомбинантными штаммами Escherichia coli.

Ограничения применения

• Среда общего назначения и может не поддерживать рост требовательных (fastidious) микроорганизмов.
• Для окончательной идентификации штаммов необходимо проведение дополнительных биохимических и серологических тестов.

Технические характеристики

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободнотекучий порошок от кремового до желтого цвета.
• Цвет и прозрачность готовой среды: янтарный цвет, прозрачный раствор без осадка.
• Реакция: pH 2,8 % (масса/объем) водного раствора при 25 °C составляет 7,0 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Дополнительные параметры

• Происхождение компонентов: животное
• Тип продукта: стандартная среда
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)
• Сертификат: ФСЗ 2009/03706

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 15–25 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать для предотвращения комкования. Хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

При работе со средой и культурами следует соблюдать правила надлежащей микробиологической лабораторной практики: использовать защитные перчатки, одежду, средства защиты глаз и лица.

Утилизация: все загрязненные материалы и использованные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией в соответствии с установленными лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.