Бульон Ханахана (среда SOB) для рекомбинантных E.coli HiMedia M1252-500G (уп/500 гр)

Питательная микробиологическая среда Бульон Ханахана (среда SOB) для рекомбинантных E.coli HiMedia M1252-500G (уп/500 гр) — порошкообразный бульон для культивирования рекомбинантных штаммов Escherichia coli, с конечным pH 7,0 ± 0,2. Среда применяется при подготовке и трансформации компетентных клеток; перед использованием 28,08 г порошка растворяют в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды и стерилизуют в автоклаве при 121 °C в течение 15 мин.

Назначение

Бульон Ханахана (среда SOB) рекомендован для культивирования изолированных рекомбинантных штаммов Escherichia coli. Среда используется при подготовке и трансформации компетентных клеток, включая клетки, подвергаемые электропорации или обработке хлоридом кальция (CaCl₂) в охлаждённых условиях.

Тип образца: изолированные рекомбинантные Escherichia coli.

Состав

Состав среды:

Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Принцип действия и интерпретация

Трансформация — процесс поглощения чужеродного генетического материала с последующей рекомбинацией, приводящей к генетическому изменению клетки. Способность бактерии поглощать экзогенную ДНК из внеклеточной среды называется компетентностью бактерии.

Для формирования компетентности важны факторы, влияющие на поверхность клетки, особенно изменения проницаемости мембраны, которые позволяют чужеродной ДНК проникать в клетку-реципиент. После трансформации бактерии необходимо культивировать на богатой изотонической среде, чтобы клетка могла восстановиться после процесса трансформации, устранить повреждения мембраны, возникшие при проникновении ДНК, и продолжить репликацию.

Бульон Ханахана, разработанный Hanahan, применяется для культивирования рекомбинантных штаммов Escherichia coli, прошедших трансформацию. Среда является питательным богатым ростовым бульоном для подготовки и трансформации компетентных клеток.

Для получения компетентных клеток бактерии выращивают в бульоне Ханахана до требуемой мутности, после чего используют стандартные процедуры электропорации либо обработки CaCl₂ в охлаждённых условиях. Для выживания повреждённых компетентных клеток требуется богатая изотоническая среда. Бульон Ханахана с добавлением 0,4 % декстрозы применяют на конечной стадии трансформации; декстроза служит источником углерода и энергии для восстановления повреждений мембраны и последующей репликации.

Триптон и дрожжевой экстракт обеспечивают рекомбинантные E. coli азотистыми соединениями и факторами роста. Хлориды калия и натрия поддерживают изотонические условия. Сульфат магния добавляется как необходимый компонент для репликации ДНК.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 28,08 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте раствор до полного растворения среды.
3. Распределите приготовленную среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для образцов изолированных микроорганизмов применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными лабораторными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид порошка: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Приготовленная среда: раствор янтарного цвета, прозрачный, без осадка.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 2,8 % масс./об. при 25 °C: pH 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH

Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Наименование: Hanahan’s Broth, SOB Medium — бульон Ханахана, среда SOB
• Артикул: M1252-500G
• Назначение изделия: бульон
• Производитель: HiMedia
• Форма выпуска: порошок
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: HDPE
• Происхождение: животное
• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2
• Реакция 2,8 % масс./об. водного раствора при 25 °C: pH 7,0 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,80–7,20
• Масса упаковки: 500 г
• Сертификат: ФСЗ 2009/03706

Условия хранения и срок годности

• Хранение сухого продукта: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение приготовленной среды: при температуре 15–25 °C.
• Условия хранения: сухое проветриваемое помещение, защищённое от экстремальных температур и источников воспламенения.
• Хранение после вскрытия: хранить продукт в сухом виде, плотно закрыв флакон.
• Защита от влаги: плотно закрывать контейнер после каждого использования для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности продукта.
• Срок применения: использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• Рекомендуемый период использования: рабочие характеристики продукта сохраняются оптимально при использовании в пределах установленного срока годности.

Неправильное хранение продукта может привести к образованию комков.

Ограничения применения

1. Среда является средой общего назначения и может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.
2. Для дальнейшей идентификации необходимо провести дополнительные биохимические и серологические тесты.

Оценка рабочих характеристик

Рабочие характеристики среды ожидаются при использовании в соответствии с указаниями на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Меры предосторожности

• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь обязан обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцом, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.