Бульон Тартоффа-Хоббса для рекомбинантных E.coli HiMedia M1250-500G (уп/500 гр)

Бульон Тартоффа-Хоббса для рекомбинантных E.coli HiMedia M1250-500G (уп/500 гр) — жидкая питательная среда производства HiMedia для культивирования рекомбинантных штаммов Escherichia coli. Среда поддерживает высокую плотность клеточной массы и длительное сохранение культуры в логарифмической фазе роста, что применяется для получения рекомбинантных белков и плазмидной ДНК.

Назначение

Бульон Тартоффа—Хоббса (Terrific Broth) рекомендован для культивирования рекомбинантных штаммов Escherichia coli. Среда часто используется вместо бульона Лурия—Бертани M1151 для повышения выхода плазмидной ДНК и рекомбинантных белков.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 47,6 г сухой среды в 1000 мл дистиллированной воды, содержащей 4 мл глицерина.
2. При необходимости нагревайте среду до полного растворения.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Тщательно перемешайте и разлейте приготовленную среду в необходимом объёме.

Принцип действия и интерпретация

Среда Тартоффа—Хоббса разработана для культивирования рекомбинантных штаммов Escherichia coli. При выращивании в этой среде такие штаммы имеют удлинённую фазу роста.

Бульон Тартоффа—Хоббса поддерживает высокую плотность клеток и клеточной массы, а также длительное сохранение роста в логарифмической фазе. Благодаря этому обеспечивается повышенный выход рекомбинантных белков и плазмидной ДНК.

Ферментативный гидролизат казеина и дрожжевой экстракт обеспечивают рекомбинантные штаммы E. coli необходимыми питательными веществами и кофакторами для роста. Добавление дополнительного количества пептона и дрожжевого экстракта позволяет увеличить выход плазмид в расчёте на объём среды.

Два фосфата обеспечивают эффективное буферное действие среды. Глицерин используется как источник углеводов. В отличие от глюкозы, глицерин не ферментируется с образованием уксусной кислоты.

Процедуры инокуляции, инкубации и получения рекомбинантных штаммов подробно описаны у Sambrook и соавт.

Контроль качества

Внешний вид

Цвет: от кремового до светло-жёлтого.

Форма: однородный, сыпучий порошок.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Светло-янтарный прозрачный раствор без осадка.

Реакция среды

Реакция 4,76 % масс./об. водного раствора при 25 °C.

• pH: 7,2 ± 0,2

Диапазон pH

• pH: 7,00–7,40

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики M1250 определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч. Рост оценивают по появлению мутности.

Технические характеристики

• Назначение изделия: бульон
• Масса упаковки: 500 г
• Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,00–7,40
• Сертификат: ФСЗ 2009/03707

Условия хранения и срок годности

• Условия хранения сухой среды: при температуре ниже 30 °C в плотно закрытой ёмкости.
• Условия хранения приготовленной среды: при 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Техническое отличие от бульона Лурия—Бертани

Бульон Тартоффа—Хоббса содержит повышенные количества ферментативного гидролизата казеина и дрожжевого экстракта, фосфатную буферную систему и глицерин как источник углеводов; среда применяется для повышения выхода плазмидной ДНК и рекомбинантных белков по сравнению с использованием бульона Лурия—Бертани M1151.