Сахарный бульон с бромкрезоловым зеленым HiMedia M106-500G (уп/500 гр)

Питательная среда Сахарный бульон с бромкрезоловым зеленым HiMedia M106-500G (уп/500 гр) производства HiMedia для определения кариесогенной активности лактобактерий; конечный pH среды при 25 °C составляет 4,8 ± 0,2. Среда применяется для культивирования и оценки лактобактерий в слюне по скорости образования кислоты, которую регистрируют по изменению цвета индикатора от сине-зелёного до жёлтого.

Назначение

Сахарный бульон с бромкрезоловым зелёным предназначен для оценки количества и скорости образования кислоты лактобактериями; изменение кислотности определяется по изменению цвета индикатора бромкрезолового зелёного. Основная область применения — оценка активности кариеса по клиническим образцам слюны.

Тип образца: клинический образец — слюна.

Состав

Расчётный состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих параметров.

Конечный pH при 25 °C: 4,8 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация

Кариес развивается вследствие образования микробной кислоты и зубного налёта. Зубной налёт создаёт условия для развития кариеса, поскольку концентрирует кислотообразующие бактерии на поверхности зуба, формирует анаэробную среду для ферментации, удерживает образующиеся кислоты и препятствует защитному действию слюны.

Кариозные поражения являются результатом химического воздействия на эмаль и дентин. Деминерализация зубных тканей чередуется с периодами реминерализации. Если деминерализация преобладает над реминерализацией, подповерхностное кариозное поражение переходит в клиническую полость, а разрушение распространяется на дентин.

Для определения скорости и количества кислоты, образуемой микроорганизмами слюны, применяется колориметрический метод Снайдера. Методика основана на использовании агаровой среды, известной как агар для теста Снайдера. Позднее Албан модифицировал методику и сообщил о более высокой точности по сравнению с первоначальным вариантом.

Среда является дифференциальной и основана на определении скорости образования кислоты из декстрозы кислотогенными микроорганизмами ротовой полости. Образование кислоты регистрируют по изменению цвета индикатора бромкрезолового зелёного от сине-зелёного до жёлтого.

Функции компонентов:

• Пептон: источник углерода, азота, аминокислот с длинной цепью, витаминов и минеральных веществ.
• Декстроза: источник углеводов.
• Бромкрезоловый зелёный: индикатор pH.
• Агар: желирующий компонент среды.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 65,02 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду по 10 мл в пробирки.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки в вертикальном положении.
6. Не перегревайте среду.

Методика теста Снайдера

1. Соберите образцы слюны до завтрака, до чистки зубов либо непосредственно перед обедом или ужином.
2. Для стимуляции слюноотделения пациент должен жевать парафин в течение 3 мин.
3. Соберите слюну в стерильную пробирку или флакон.
4. Тщательно перемешайте образец.
5. Перенесите 0,2 мл образца в стерильную пробирку с расплавленной и охлаждённой до 45 °C средой для теста Снайдера.
6. Перемешайте посевной материал вращательными движениями инокулированных пробирок.
7. Инкубируйте пробирки в вертикальном положении при 37 °C в течение 72 ч.
8. Оцените скорость образования кислоты по времени изменения цвета среды:
   • выраженная активность — изменение цвета в течение 24 ч;
   • умеренная активность — изменение цвета в течение 48 ч;
   • слабая активность — изменение цвета в течение 72 ч.

Модифицированная методика Албана

1. Соберите нестимулированную слюну в объёме, достаточном для покрытия среды в пробирке.
2. Если сбор образца затруднён, смочите стерильный ватный тампон слюной под языком или проведите тампоном по поверхностям зубов.
3. Поместите тампон непосредственно под поверхность среды.
4. Инкубируйте пробирки при 35 °C вместе с неинокулированным контрольным образцом.
5. Исследуйте пробирки ежедневно в течение 4 суток.
6. Сравнивайте изменение цвета среды с контрольной пробиркой.

Интерпретация результатов

Результат регистрируют по степени изменения цвета среды:

• отсутствие изменения цвета — отрицательная реакция: −;
• начало изменения цвета на жёлтый — +;
• половина среды жёлтая — ++;
• три четверти среды жёлтые — +++;
• вся среда жёлтая — ++++.

Ежедневные результаты показывают скорость и объём образования кислоты. Для установления исходной точки необходимо получить не менее двух образцов, собранных с интервалом 2–4 суток.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до зеленовато-жёлтого цвета.

Желирование

Желирование: плотный гель, сопоставимый с 2,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в пробирках образуется гель изумрудно-зелёного цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.

Реакция среды

Реакция: водный раствор с массово-объёмной концентрацией 6,5 % при 25 °C.

pH: 4,8 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–72 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Технические характеристики

• Форма выпуска: порошок.
• Тип продукта: стандартный.
• Происхождение: животное.
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE).
• Назначение изделия: бульон.
• Конечный pH при 25 °C: 4,8 ± 0,2.
• Масса сухой среды для приготовления 1000 мл: 65,02 г.
• Объём среды в одной пробирке при приготовлении: 10 мл.
• Температура охлаждения среды перед внесением образца: 45 °C.
• Температура инкубации по тесту Снайдера: 37 °C.
• Продолжительность инкубации по тесту Снайдера: 72 ч.
• Температура инкубации по модифицированной методике Албана: 35 °C.
• Продолжительность наблюдения по модифицированной методике Албана: 4 суток.
• Температура стерилизации: 121 °C.
• Продолжительность стерилизации: 15 мин.
• Давление при автоклавировании: 15 фунтов (≈0,103 МПа).
• Сертификат: ФСЗ 2009/03705.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов необходимо применять соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными лабораторными руководствами. При работе с клиническим материалом следует соблюдать стандартные меры предосторожности.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

Некоторые микроорганизмы могут демонстрировать слабый рост из-за различий в потребностях в питательных веществах.

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованных условиях.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок хранения: использовать до даты истечения срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия: хранить продукт в сухом виде в плотно закрытой ёмкости.
• Требование к упаковке: плотно закрывать флакон для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности продукта.
• Условия помещения: сухое, вентилируемое место, защищённое от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования: плотно закрывать контейнер.

Неправильное хранение может привести к образованию комков. Рабочие характеристики продукта сохраняются лучше всего при использовании в пределах установленного срока