Бульон для детекции гидролиза гиппурата HiMedia M1054-100G (уп/100 гр)

Питательный микробиологический бульон для детекции гидролиза гиппурата HiMedia M1054-100G (уп/100 гр) — сухая порошковая среда массой 100 г с конечным pH 7,4 ± 0,2. Применяется для выявления микроорганизмов, гидролизующих гиппурат, в клинических и неклинических образцах; предназначен только для профессионального применения in vitro.

Назначение и область применения

Среда рекомендована для выявления микроорганизмов, гидролизующих гиппурат, в клинических и неклинических образцах.

Тип образца: клинические образцы — фекалии.

Подтверждённые колонии β-гемолитических стрептококков инокулируют в приготовленный бульон. Определение способности микроорганизма гидролизовать гиппурат используют для дифференциации бычьих β-гемолитических стрептококков группы B и человеческих β-гемолитических стрептококков группы B, а также для дифференциации β-гемолитических стрептококков группы B от β-гемолитических стрептококков группы A и неэнтерококковых стрептококков группы D.

Состав

Состав среды:

# Эквивалент порошка для сердечной инфузии.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами рабочих характеристик.

Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2.

Принцип измерения и интерпретация

Способность гемолитических стрептококков человеческого и бычьего происхождения гидролизовать гиппурат натрия используют как дифференциальный признак. При ферментативном гидролизе гиппурата натрия конечным продуктом образуется бензойная кислота.

Порошок HI и пептон обеспечивают питательные вещества, необходимые для бактериального метаболизма. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие. Гиппурат натрия служит субстратом для определения гидролиза гиппурата.

Количество образовавшегося осадка связано со степенью гидролиза гиппурата. Положительная реакция определяется по коричневому хлопьевидному нерастворимому осадку, который сохраняется после встряхивания через 10 мин. Если осадок растворяется при встряхивании, гиппурат не гидролизован, и реакцию оценивают как отрицательную.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 35,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте смесь для полного растворения среды.
3. Разлейте по 5 мл в пробирки или в требуемом объёме.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 psi (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Методика проведения анализа

Приготовление раствора хлорида железа(III)

Состав раствора хлорида железа(III):

• Хлорид железа(III): 12,0 г.
• Дистиллированная вода: 94,6 мл.
• Концентрированная соляная кислота: 5,4 мл.

Порядок приготовления:

1. Добавьте примерно 75 мл дистиллированной воды в мерную колбу вместимостью 100 мл.
2. Перенесите пипеткой 5,4 мл соляной кислоты в колбу, направляя кислоту по стенке колбы.
3. Добавьте 12 г хлорида железа(III).
4. Растворите компоненты, осторожно прогревая колбу и перемешивая её содержимое круговыми движениями.
5. Доведите объём до 100 мл дистиллированной водой.

Полученный раствор имеет оранжевый цвет.

Проведение реакции гидролиза гиппурата

1. Инокулируйте пробирки 1–2 каплями чистой бульонной культуры подтверждённого β-гемолитического Streptococcus, выращенной в течение 18–24 ч, или одной–двумя изолированными колониями с первичной изоляционной чашки.
2. Включите в постановку неинокулированную пробирку в качестве отрицательного контроля и положительный контроль — Streptococcus agalactiae.
3. Инкубируйте пробирки с ослабленными крышками в аэробных условиях при температуре 35 ± 2 °C в течение 48 ч.
4. После инкубации центрифугируйте все мутные культуры и используйте в реакции надосадочную жидкость.
5. Асептически перенесите определённую аликвоту культуры или её надосадочной жидкости в небольшую пробирку.
6. Добавьте 0,2 мл 12%-ного раствора FeCl₃.
7. Немедленно встряхните пробирку.
8. Выдержите пробирку 10–15 мин перед интерпретацией результата.
9. Положительный результат: после встряхивания через 10 мин сохраняется коричневый хлопьевидный нерастворимый осадок, что указывает на гидролиз гиппурата.
10. Отрицательный результат: осадок растворяется при встряхивании, что указывает на отсутствие гидролиза гиппурата.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: жёлтый прозрачный раствор без осадка.

Реакция и pH

Реакция: для 3,5%-ного водного раствора по массе к объёму при 25 °C.

pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения методики

После добавления реагента FeCl₃ пробирку необходимо встряхнуть до интерпретации результата. Встряхивание вместе с избытком FeCl₃ способствует растворению растворимых осадков гиппурата и глицината, что обеспечивает отрицательную реакцию.

Если пробирку не встряхнуть, при отсутствии гидролиза гиппурата может быть получен ложноположительный результат.

Условия хранения и срок годности

• Хранение сухого продукта: при 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости.
• Хранение приготовленной среды: при 15–30 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия: хранить продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков вследствие гигроскопичности порошка.
• При неправильном хранении возможно образование комков.
• Место хранения: сухое вентилируемое помещение, защищённое от экстремальных температур и источников возгорания.
• После использования контейнер необходимо плотно закрыть.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение установленного срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального