Стерильная готовая питательная среда HiMedia LQ083-50X5ML Нитратный бульон (50×5 мл) для выявления восстановления нитратов бактериями, с конечным значением pH 7,0 ± 0,2. Среда предназначена для анализа изолированных микроорганизмов из клинических и неклинических образцов; объём среды во флаконе составляет 5 мл.

Назначение

Стерильная готовая к применению среда предназначена для выявления восстановления нитратов бактериями.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с установленными параметрами эффективности. HM-пептон B эквивалентен мясному экстракту.

Принцип измерения и интерпретация

Нитратный бульон приготовлен в соответствии с формулой, опубликованной в руководстве «Исследование чистых культур бактерий» Общества американских бактериологов.

Способность восстанавливать нитраты используется для дифференциации и идентификации различных типов бактерий, особенно представителей семейства Enterobacteriaceae. Неферментирующие и другие грамотрицательные палочки различаются по способности восстанавливать нитраты. Некоторые представители этой группы способны к денитрификации — восстановлению нитрата до газообразного азота. Для грамотрицательных палочек, ферментирующих глюкозу, образование газообразного азота из нитрата является важным дифференциальным признаком.

Нитрат калия в составе среды служит субстратом для определения восстановления нитрата бактериями. Некоторые бактерии преобразуют нитрат в нитрит, аммиак или газообразный азот.

Наличие нитритов выявляют добавлением по 0,5 мл раствора сульфаниловой кислоты (R015) и раствора α-нафтиламина (R009). Появление красно-фиолетового окрашивания вследствие образования красного диазониевого красителя — p-сульфобензол-азо-α-нафтиламина — указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Если окрашивание не появляется, это означает, что нитрат либо не восстановлен, либо восстановление продолжилось до аммиака или газообразного азота. Результат проверяют добавлением небольшого количества цинковой пыли в пробирку. Цинк восстанавливает нитрат до нитрита, вызывая появление красного окрашивания. Красное окрашивание указывает, что нитрат присутствует в среде и ранее не был восстановлен. Отсутствие красного окрашивания после добавления цинковой пыли указывает на отсутствие нитрата, то есть на его дальнейшее восстановление за пределы стадии нитрита.

Таким образом, восстановление нитратов подтверждается либо наличием конечного продукта катаболизма, либо отсутствием нитрата в среде. Представители Enterobacteriaceae обычно восстанавливают нитрат до нитрита, который реагирует с сульфаниловой кислотой и N,N-диметил-1-нафтиламином с образованием красного окрашивания. Эта реакция называется реакцией Грисса.

Если микроорганизм быстро растёт и активно восстанавливает нитрат, тест следует выполнять после раннего периода инкубации, поскольку нитрит может быть восстановлен далее до азота.

Методика проведения анализа

1. Промаркируйте готовый к применению флакон LQ083.
2. Внесите образец в количестве 50–100 КОЕ.
3. Инкубируйте при заданных температуре и времени.
4. Для проведения теста добавьте в пробирку с исследуемой культурой несколько капель каждого реагента: сульфаниловой кислоты (R015) и раствора α-нафтиламина (R009).
5. Выраженное красное или розовое окрашивание указывает на восстановление нитрата.
6. Одновременно исследуйте контрольную пробирку без инокуляции.
7. Если розовое окрашивание не образуется, добавьте небольшое количество цинковой пыли для подтверждения отсутствия нитрата в среде.

Тип исследуемого образца

Изолированные микроорганизмы из клинических и неклинических образцов.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее обозначался как Enterobacter aerogenes.

Контроль качества

• Внешний вид: стерильный прозрачный нитратный бульон во флаконах.
• Цвет: раствор светло-янтарного цвета.
• Количество среды: 5 мл во флаконе.
• Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.
• pH: 6,80–7,20.

Условия хранения и срок годности

• Условия хранения при получении: 15–30 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• Рабочие характеристики среды гарантируются при использовании в течение указанного срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Меры предосторожности

• Для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Указания по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения метода

1. Восстановление нитратов не является подтверждающим тестом. Полная идентификация бактерий должна включать оценку морфологии, реакции по Граму, биохимические и серологические тесты. Добавление избыточного количества цинка может привести к ложноотрицательной реакции. При проведении теста на восстановление нитратов с α-нафтиламином окрашивание, возникающее при положительной реакции, может быстро исчезать.
2. Нитратный тест является очень чувствительным; для определения отсутствия нитритов в среде необходимо исследовать неинокулированный нитратный контроль с добавлением реагентов.

Оценка эффективности

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с указаниями на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания. При утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцом, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.