HiMedia GMV070-500G Буферный глюкозный HiVeg бульон (глюкозо-фосфатный)

Гранулированная питательная среда HiMedia GMV070-500G Буферный глюкозный HiVeg бульон (глюкозо-фосфатный) с растительными пептонами и конечным pH 6,9 ± 0,2. Среда применяется для биохимической идентификации бактерий по реакциям метилового красного (MR) и Фогеса—Проскауэра (VP), при этом готовый препарат хранят при 2–8 °C.

Назначение

Буферный глюкозный HiVeg бульон используют для проведения реакций метилового красного (MR) и Фогеса—Проскауэра (VP) при биохимической идентификации бактерий, включая представителей семейства Enterobacteriaceae. Среда содержит пептоны растительного происхождения вместо пептонов животного происхождения и не несёт рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (TSE).

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами рабочих характеристик.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 17 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Разлейте среду в пробирки по 10 мл или в требуемом объёме.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов, что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.

Принцип и интерпретация

Метиловый красный и реакция Фогеса—Проскауэра относятся к биохимическим тестам, применяемым для идентификации видов бактерий. Эти тесты были первоначально исследованы Фогесом и Проскауэром, а позднее Кларком и Лабсом для дифференциации представителей группы coli-aerogenes. Обе реакции основаны на выявлении определённых продуктов распада углеводов.

Все представители семейства Enterobacteriaceae по определению ферментируют глюкозу. В MR–VP-бульоне через 18–24 ч инкубации ферментация приводит к образованию кислых продуктов обмена, поэтому первоначально все энтеробактерии при проверке дают положительную реакцию метилового красного.

После дальнейшей инкубации, необходимой по процедуре анализа и составляющей 2–5 суток, MR-положительные микроорганизмы продолжают образовывать кислоты. Это приводит к снижению pH до кислых значений, преодолению фосфатной буферной системы и сохранению кислой среды в питательной среде — pH 4,2 или ниже.

MR-отрицательные микроорганизмы дополнительно метаболизируют первоначальные продукты ферментации путём декарбоксилирования с образованием нейтрального ацетилметилкарбинола (ацетоина). В результате кислотность среды снижается, а pH смещается к нейтральному значению — pH 6,0 или выше.

В присутствии атмосферного кислорода и щёлочи нейтральные конечные продукты — ацетoin и 2,3-бутандиол — окисляются до диацетила. Диацетил реагирует с креатином с образованием красного окрашивания.

Методика реакции метилового красного

Реакцию метилового красного проводят после инкубации в течение 5 суток при 30 °C.

Методика реакции Фогеса—Проскауэра

Культуры для реакции Фогеса—Проскауэра инкубируют при 30 °C в течение 24–48 ч.

Для выполнения реакции VP описаны следующие процедуры.

Метод Веркмана

1. Добавьте 2 капли 2%-ного раствора хлорида железа(III) к 50 мл культуры.
2. Добавьте 5 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия.
3. Тщательно встряхните пробирку для перемешивания.
4. Устойчивая медная окраска, развивающаяся через несколько минут, указывает на положительную реакцию.

Метод О’Миры

1. Добавьте 25 мг твёрдого креатина к 5 мл культуры.
2. Добавьте 5 мл концентрированного 40%-ного раствора гидроксида натрия.
3. Тщательно встряхните пробирку.
4. Развитие красной окраски через несколько минут указывает на положительную реакцию.

Модифицированная методика О’Миры

Левин, Эпштейн и Во внесли изменения в методику О’Миры, растворив креатин в концентрированном растворе гидроксида калия — реагенте О’Миры R031.

Метод Барритта

Во, Митчелл и Левин рекомендовали метод Барритта:

1. К 5 мл культуры добавьте 1 мл реагента Барритта B — 40%-ного гидроксида калия, R030.
2. Добавьте 3 мл реагента Барритта A — 5%-ного α-нафтола в абсолютном этаноле, R029.
3. Положительная реакция определяется по появлению розовой или красной окраски эозина в течение 2–5 мин.

MR- и VP-тесты не следует использовать как единственный способ дифференциации исследуемых групп. Известный ацетоин-положительный микроорганизм иногда не даёт положительной реакции VP. Для устранения такой вероятности следует осторожно прогреть культуру, содержащую реагенты VP.

Контроль качества

Внешний вид

Цвет гранулированной среды: от кремового до жёлтого.

Приготовленная среда

В пробирках образуется прозрачный раствор светло-жёлтого цвета.

Реакция среды

Реакция 1,7%-ного водного раствора при 25 °C: pH 6,9 ± 0,2.

Диапазон pH

Диапазон pH: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 30 °C в течение 48 ч.

Технические характеристики

Хранение и срок годности

Храните сухую среду в плотно закрытой ёмкости при температуре ниже 30 °C. Приготовленную среду храните при 2–8 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Сравнительное техническое отличие

В отличие от сред на основе пептонов животного происхождения, буферный глюкозный HiVeg бульон содержит растительные пептоны и не содержит компонентов животного происхождения.