Питательная микробиологическая среда HiMedia GM463-500G Триптоновый бульон (триптоновая вода) предназначена для выявления микроорганизмов, продуцирующих индол, при рабочей концентрации 15,0 г/л. Среда применяется для анализа водных и клинических образцов, а подтверждение идентификации микроорганизмов требует дополнительных биохимических тестов.

Назначение и область применения

HiMedia GM463-500G используют для выявления микроорганизмов, продуцирующих индол, выделенных из клинических и не­клинических образцов.

Типы образцов:

• пробы воды;
• клинические образцы: фекалии, моча.

Триптоновая вода рекомендована APHA для выявления продукции индола колиформными бактериями, что является важным признаком при дифференциации бактерий. Модификация триптоновой воды M463I рекомендована комитетом ISO для той же цели.

Среду применяют совместно с желчно-зелёным Brilliant Green бульоном 2 % (M121) для определения наиболее вероятного числа (НВЧ, MPN) Escherichia coli в пищевых образцах. Основанием для предварительного теста на E. coli служат рост и образование газа в M121, а также продукция индола в триптоновой воде после инкубации обеих сред при 44 ± 1 °C.

Идентификация продукта

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Тест определяет способность отдельных бактерий разлагать аминокислоту триптофан с образованием индола, который накапливается в питательной среде. Триптон служит подходящим субстратом для продукции индола благодаря высокому содержанию триптофана.

Некоторые микроорганизмы расщепляют триптофан с помощью ферментов, катализирующих образование индола посредством гидролитической активности. Образовавшийся индол выявляют с помощью реактива Ковача или реактива Эрлиха:

• индол взаимодействует с присутствующим в реактиве альдегидом;
• в спиртовом слое образуется красное окрашивание;
• спиртовой слой извлекает и концентрирует красный окрашенный комплекс.

Для определения индола среду инокулируют посевным материалом из 18–24-часовой чистой культуры. После инкубации к среде добавляют индольный реактив; образование красного кольца в верхней части пробирки указывает на продукцию индола.

Тест на индол используют как вспомогательный метод дифференциации микроорганизмов по способности продуцировать индол. Для полной идентификации микроорганизмов необходимы дополнительные биохимические подтверждающие тесты.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 15,0 г сухой гранулированной среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Разлейте приготовленную среду в пробирки или колбы в требуемом объёме.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (ориентировочно 0,103 МПа или 1,03 бар) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Методика определения индола

1. Инокулируйте триптоновую воду посевным материалом из 18–24-часовой чистой культуры.
2. Инкубируйте пробирки при 35 ± 2 °C в течение 18–24 ч.
3. Добавьте непосредственно в пробирку 0,5 мл индольного реактива R008.
4. Перемешайте содержимое пробирки.
5. Оставьте пробирки на 5–10 мин.
6. Оцените результат: образование красного кольца в верхней части пробирки указывает на продукцию индола.

Контроль качества

Внешний вид и характеристики приготовленной среды:

• Соответствующие номера WDCM.

Ранее микроорганизм был известен как Enterobacter aerogenes.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно действующим руководствам и локальным стандартам.

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Среда предназначена для диагностики вне организма (in vitro).
• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила работы в микробиологической лаборатории.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

Для подтверждения результата необходимо выполнить дополнительные биохимические тесты.

Рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 15–30 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде в плотно закрытом контейнере.
• Плотно закрывайте флакон после каждого использования.
• Из-за гигроскопичности продукта нарушение условий хранения может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• Рабочие характеристики сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте утверждённые лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими методами лабораторной работы.