HiMedia GM070S-500G Буферный глюкозный бульон (среда MR-VP)

Питательная микробиологическая среда HiMedia GM070S-500G Буферный глюкозный бульон (среда MR-VP) — гранулированный бульон для биохимической идентификации микроорганизмов. Среда применяется для постановки реакций метилового красного и Фогеса—Проскауэра, при этом для выявления Vibrio parahaemolyticus требуется добавление 2–3 % хлорида натрия.

Назначение

Буферный глюкозный бульон MR-VP используют для одновременного проведения тестов метилового красного (MR) и Фогеса—Проскауэра (VP) в одной и той же среде, но в разных пробирках. Среда предназначена для выявления представителей группы коли-аэрогенов, а также Escherichia coli, Vibrio parahaemolyticus и Bacillus cereus, вызывающих пищевые отравления.

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 15 г сухой гранулированной среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Разлейте приготовленную среду в пробирки по 3 мл или в требуемом объёме.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм² (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Принцип и интерпретация реакций

Добавление метилового красного к культурам Escherichia coli вызывает красное окрашивание вследствие высокой кислотности, образующейся при ферментации декстрозы.

В тесте Фогеса—Проскауэра после добавления гидроксида калия к культуре, выращенной в специальной питательной среде, появляется красное окрашивание. Реакция обусловлена способностью микроорганизмов образовывать из декстрозы нейтральный продукт ацетоин — ацетилметилкарбинол.

В присутствии кислорода и щёлочи ацетоин окисляется до диацетила. Диацетил реагирует с креатином с образованием красного окрашивания.

Бульон MR-VP позволяет выполнять оба теста в одной и той же питательной среде, используя разные пробирки. Формуляция среды соответствует рекомендациям Бюро индийских стандартов (BIS) и комитета Международной организации по стандартизации (ISO) для выявления группы коли-аэрогенов. Модифицированная среда GM070S/M070S рекомендована Бюро индийских стандартов для выявления E. coli, Vibrio parahaemolyticus и Bacillus cereus, вызывающих пищевые отравления.

Для проведения теста VP с Vibrio parahaemolyticus в среду необходимо добавить 2–3 % хлорида натрия.

Методика проведения тестов

Тест метилового красного

Тест MR проводят после инкубации культуры при 30 °C в течение не более 5 суток. Положительная реакция характеризуется появлением ярко-красного окрашивания.

Тест Фогеса—Проскауэра

Культуры для теста VP инкубируют при 30 °C в течение 24–48 ч. Положительная реакция характеризуется появлением эозиново-розового окрашивания в течение 2–5 мин после добавления реагентов.

Метод Веркмана

1. К 50 мл культуры добавьте 2 капли 2%-ного раствора хлорида железа(III).
2. Добавьте 5 мл 10%-ного гидроксида натрия.
3. Тщательно встряхните пробирку для перемешивания.
4. Устойчивое медное окрашивание, развивающееся через несколько минут, указывает на положительную реакцию.

Метод О’Мира

1. Добавьте 25 мг твёрдого креатина к 5 мл культуры.
2. Добавьте 5 мл концентрированного 40%-ного гидроксида натрия.
3. Тщательно встряхните пробирку.
4. Красное окрашивание, развивающееся через несколько минут, указывает на положительную реакцию.

Левин, Эпштейн и Воган модифицировали метод О’Мира, растворив креатин в концентрированном растворе гидроксида калия.

Метод Барритта

К 5 мл культуры добавьте 1 мл 40%-ного гидроксида калия и 3 мл 5%-ного α-нафтола в абсолютном этаноле. Положительный результат определяется по появлению эозиново-розового окрашивания в течение 2–5 мин.

Контроль качества

• Внешний вид: гранулированная среда кремового цвета.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный раствор светло-жёлтого цвета без осадка.
• Реакция: реакция 1,5%-ного водного раствора при 25 °C.
• pH: 7,40–7,60.
• Номинальное значение pH: 7,5 ± 0,1.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 30 °C в течение 48 ч.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia.
• Артикул: GM070S-500G.
• Назначение изделия: бульон.
• Физическая форма: гранулированная.
• Тип продукта: гранулированный.
• Происхождение: животное.
• Тип упаковки: ПНД (HDPE).
• Масса: 500 г.
• Температура эксплуатации и приготовления: 10–30 °C.
• Конечный pH при 25 °C: 7,5 ± 0,1.
• Диапазон pH: 7,40–7,60.

Хранение и срок годности

• Сухую среду хранить в плотно закрытой упаковке при температуре ниже 30 °C.
• Приготовленную среду хранить при 2–8 °C.
• Использовать до даты истечения срока годности, указанной на этикетке.