Гранулированная питательная среда HiMedia GM070-100G Буферный глюкозный бульон (глюкозо-фосфатный) предназначена для постановки метил-красного и теста Фогеса—Проскауэра. Среда применяется для дифференциации представителей группы коли-аэрогенес; конечный pH составляет 6,9 ± 0,2.

Назначение

Буферный глюкозный бульон рекомендован для проведения тестов метил-красного (MR) и Фогеса—Проскауэра (VP) при дифференциации представителей группы коли-аэрогенес.

Типы исследуемых образцов:

• выделенные микроорганизмы из клинических образцов;
• пищевые и молочные образцы;
• образцы воды.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заявленных параметров проведения анализа.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 17,0 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагревайте суспензию до полного растворения среды.
3. Распределите приготовленную среду по пробиркам порциями по 10 мл или в другом требуемом объёме.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм и температуре 121 °C в течение 15 мин. Давление 15 фунтов/кв. дюйм соответствует приблизительно 0,103 МПа.

Принцип проведения MR- и VP-тестов

Тесты метил-красного и Фогеса—Проскауэра относятся к биохимическим методам идентификации видов бактерий. Первоначально эти тесты были изучены Фогесом и Проскауэром, а позднее Кларком и Лабсом для дифференциации представителей группы коли-аэрогенес. Оба теста основаны на выявлении специфических продуктов расщепления углеводов.

Все представители семейства Enterobacteriaceae по определению ферментируют глюкозу. В глюкозо-фосфатном бульоне после инкубации в течение 18–24 ч ферментация сопровождается образованием кислых продуктов метаболизма. Поэтому первоначально все энтеробактерии при проведении MR-теста дают положительную реакцию.

После дальнейшей инкубации, необходимой для процедуры тестирования и составляющей 2–5 суток, микроорганизмы, положительные по MR, продолжают образовывать кислоты. Это приводит к снижению pH до кислых значений, преодолению фосфатной буферной системы и сохранению кислой среды в питательной среде при pH 4,2 или ниже.

Микроорганизмы, отрицательные по MR, дополнительно метаболизируют первичные продукты ферментации путём декарбоксилирования с образованием нейтрального ацетилметилкарбинола (ацетоина). В результате кислотность среды уменьшается, а pH повышается до нейтральных значений — pH 6,0 или выше. В присутствии атмосферного кислорода и щёлочи нейтральные конечные продукты — ацетоин и 2,3-бутандиол — окисляются до диацетила. Диацетил реагирует с креатином с образованием красного окрашивания.

Методика проведения MR-теста

MR-тест проводят после инкубации в течение 5 суток при температуре 30 °C.

Методики проведения VP-теста

Культуры для VP-теста инкубируют при температуре 30 °C в течение 24–48 ч. Для проведения VP-теста применяют несколько процедур.

Метод Веркмана

1. К 50 мл культуры добавьте 2 капли 2%-ного раствора хлорида железа.
2. Добавьте 5 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия.
3. Встряхните пробирку для тщательного перемешивания.
4. Устойчивое медное окрашивание, развивающееся через несколько минут, указывает на положительную реакцию.

Метод О’Миры

1. Добавьте 25 мг твёрдого креатина к 5 мл культуры.
2. Добавьте 5 мл концентрированного 40%-ного раствора гидроксида натрия.
3. Тщательно встряхните пробирку.
4. Развитие красного окрашивания через несколько минут указывает на положительную реакцию.

Модифицированная методика Левина, Эпштейна и Во́гана

Методика О’Миры модифицирована растворением креатина в концентрированном растворе гидроксида калия. Для проведения реакции используется реагент О’Миры R031.

Метод Барритта

1. К 5 мл культуры добавьте 1 мл реагента Барритта B — R030, 40%-ный гидроксид калия.
2. Добавьте 3 мл реагента Барритта A — R029, 5%-ный α-нафтол в абсолютном этаноле.
3. Перемешайте пробу.
4. Положительная реакция определяется по появлению розового или красного окрашивания цвета эозина в течение 2–5 мин.

Контроль качества

Физические и химические характеристики

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при температуре 30–32 °C в течение 18–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее вид был известен как Enterobacter aerogenes.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам. Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам и действующим локальным нормативам. Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. MR- и VP-тесты не следует использовать как единственный способ дифференциации E. coli от групп Klebsiella—Enterobacter.
2. Известный микроорганизм, положительный по ацетоину, в отдельных случаях может не давать положительной реакции VP. Для устранения такой вероятности следует осторожно нагреть культуру, содержащую реагенты VP.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения: в плотно закрытой ёмкости.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде для предотвращения образования комков вследствие гигроскопичности среды.
• Неправильное хранение может