HiMedia GM070-100G Буферный глюкозный бульон (глюкозо-фосфатный)

Буферный глюкозный бульон (глюкозо-фосфатный) HiMedia GM070-100G в гранулированной форме. Рекомендуется для проведения тестов на метиловый красный (MR) и Фогеса-Проскауэра (VP) с целью дифференциации бактерий группы coli-aerogenes.

Область применения

Среда используется для биохимической идентификации бактериальных видов, в частности членов семейства Enterobacteriaceae. Применяется для анализа изолированных микроорганизмов из следующих источников:

• клинические образцы;
• пищевые продукты и молочная продукция;
• пробы воды.

Принцип измерения и интерпретация

Определение основано на выявлении специфических продуктов распада углеводов в процессе метаболизма. Все представители Enterobacteriaceae ферментируют глюкозу.

Тест на метиловый красный (MR)

После 18–24 часов инкубации ферментация приводит к образованию кислых метаболитов. При продолжении инкубации (от 2 до 5 дней) MR-положительные организмы продолжают вырабатывать кислоты, что снижает pH среды до 4,2 или ниже, преодолевая действие фосфатной буферной системы. MR-отрицательные организмы метаболизируют продукты первичной ферментации путем декарбоксилирования с образованием нейтрального ацетилметилкарбинола (ацетоина), что снижает кислотность и поднимает pH до 6,0 и выше.

Тест Фогеса-Проскауэра (VP)

В присутствии атмосферного кислорода и щелочи нейтральные конечные продукты (ацетоин и 2,3-бутандиол) окисляются до диацетила, который при взаимодействии с креатином дает красное окрашивание.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Суспендируйте 17,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте до полного растворения.
3. Разлейте по пробиркам по 10 мл (или в другом требуемом объеме).
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$ 0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.

Проведение тестов

• Тест MR: выполняется после 5 дней инкубации при 30 °C.
• Тест VP: культуры инкубируют при 30 °C в течение 24–48 часов.

Варианты выполнения VP-теста:

• Метод Веркмана: к 50 мл культуры добавить 2 капли 2 % раствора хлорида железа (III) и 5 мл 10 % раствора гидроксида натрия. Появление устойчивого медного окрашивания через несколько минут свидетельствует о положительной реакции.
• Метод О'Миры: к 5 мл культуры добавить 25 мг твердого креатина, затем 5 мл концентрированного (40 %) раствора гидроксида натрия. Появление красного цвета после перемешивания через несколько минут — положительная реакция.
• Модификация Левина, Эпштейна и Воуна: использование креатина, растворенного в концентрированном растворе гидроксида калия.
• Метод Барритта: к 5 мл культуры добавить 1 мл реагента Барритта B (40 % гидроксид калия) и 3 мл реагента Барритта A (5 % $\alpha$-нафтол в абсолютном этаноле). Положительный результат — появление эозиново-розового цвета в течение 2–5 минут.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Дополнительные параметры

• Внешний вид среды: гранулы от кремового до желтого цвета.
• Цвет и прозрачность готового раствора: светло-желтый прозрачный раствор без осадка.
• Диапазон pH: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 30–32 °C в течение 18–48 часов.

Ограничения и предостережения

1. Тесты MR и VP не должны использоваться как единственный метод дифференциации E. coli от групп Klebsiella-Enterobacter.
2. В редких случаях известные ацетоин-положительные организмы не дают положительной VP-реакции. Для устранения этого эффекта следует осторожно нагреть культуру с добавленными VP-реагентами.
3. Только для профессионального использования в лабораторной диагностике in vitro.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения (сухая среда): 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения (готовая среда): 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия плотно закрывать крышку во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты подлежат обязательному автоклавированию или сжиганию. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть деконтаминированы в соответствии с установленными лабораторными протоколами.