Бульон HiEncap™ Luria-основа, Miller's модификация HiMedia EC1725M-10NO (10 шт.)

Сухая питательная среда «Бульон HiEncap™ Luria-основа, Miller's модификация HiMedia EC1725M-10NO (10 шт.)» выпускается компанией HiMedia в желатиновых капсулах по 15,5 г, каждая рассчитана на приготовление 1000 мл среды. Среда предназначена для культивирования и поддержания рекомбинантных штаммов Escherichia coli; при необходимости в неё можно добавлять глюкозу.

Назначение и область применения

Среду используют для выращивания и поддержания рекомбинантных штаммов Escherichia coli в молекулярно-биологических исследованиях. Глюкозу добавляют по необходимости.

Состав

Формула модифицирована и стандартизирована с учётом параметров эффективности.

Принцип действия и интерпретация

Среда основана на исходной формуле бульона Лурия, описанной Миллером для выращивания и поддержания штаммов E. coli, используемых в молекулярной биологии. Бульон Лурия, модификация Миллера — богатая питательными веществами среда, рекомендованная для выращивания чистых культур рекомбинантных штаммов.

E. coli в среде LB достигает поздней логарифмической фазы роста. Некоторые плазмидные векторы могут реплицироваться до большого числа копий без селективной амплификации. Другие векторы реплицируются менее активно и требуют селективной амплификации. Для ингибирования синтеза в клетке-хозяине и, как следствие, предотвращения репликации бактериальной хромосомы можно добавлять хлорамфеникол.

В модификации Миллера содержание хлорида натрия составляет одну десятую от уровня в формуле агара LB по Ленноксу и одну двадцатую от уровня в формуле агара LB по Миллеру. Это позволяет выбирать оптимальную концентрацию соли для конкретного штамма. При необходимости среду можно асептически дополнить глюкозой.

Триптон обеспечивает среду пептидами и пептонами, а дрожжевой экстракт — витаминами группы B. Хлорид натрия служит источником ионов натрия для мембранного транспорта и поддерживает осмотическое равновесие среды.

Приготовление среды

1. Суспендируйте одну капсулу, содержащую 15,5 г среды, в 1000 мл дистиллированной или очищенной воды.
2. Нагревайте до кипения, чтобы полностью растворить среду.
3. Стерилизуйте в автоклаве при 121 °C в течение 15 мин и давлении 15 psi (около 0,10 МПа).
4. Охладите до 45–50 °C.
5. При необходимости добавьте 20%-й объёмный раствор глюкозы: 5 мл на 500 мл среды или 10 мл на 1000 мл среды.
6. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные пробирки или колбы.

Образцы и обращение с ними

Тип образца: рекомбинантные штаммы E. coli.

При работе с образцами рекомбинантных штаммов соблюдайте установленные правила обращения с образцами и стандартные лабораторные методы. После использования загрязнённые материалы необходимо автоклавировать перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид: желатиновая капсула с гранулированной средой кремового или жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: раствор жёлтого или янтарного цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.

Количество среды: 15,5 г в капсуле; достаточно для приготовления 1000 мл.

Реакция: для водного раствора с концентрацией 1,55 % масс./об. при 25 °C; pH 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

• Соответствующие номера WDCM.

Ограничения применения

• Некоторые штаммы могут расти слабо из-за различий в потребностях в питательных веществах.
• Для полной идентификации необходимо провести дополнительные биохимические и серологические исследования.

Эффективность среды ожидается при соблюдении инструкции на этикетке и использовании до истечения срока годности при рекомендованной температуре хранения.

Хранение и срок годности

Храните продукт при 10–30 °C в плотно закрытой таре. После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрывая ёмкость, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности. При неправильном хранении возможно комкование.

Приготовленную среду храните при 15–25 °C. Храните продукт в сухом проветриваемом месте, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывайте ёмкость. Используйте продукт до срока годности, указанного на этикетке.

Меры предосторожности и утилизация

Перед вскрытием контейнера прочитайте маркировку. При работе используйте защитные перчатки, одежду, очки и средства защиты лица. Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами, а также стандартные меры предосторожности. Дополнительные указания по безопасности приведены в паспортах безопасности.

Использованные или непригодные препараты утилизируйте безопасным способом — автоклавированием и/или сжиганием. При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцами, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методами.

Технические характеристики