Бульон HiEncap™ Luria-основа, Miller's модификация HiMedia EC1725D-25NO (25 шт.)

Сухая питательная среда «Бульон HiEncap™ Luria-основа, Miller's модификация HiMedia EC1725D-25NO (25 шт.)» поставляется в желатиновых капсулах по 7,75 г для приготовления 500 мл среды. Среда предназначена для культивирования и поддержания рекомбинантных штаммов Escherichia coli с добавлением глюкозы или без неё; содержание хлорида натрия составляет 0,500 г/л.

Назначение

Среда применяется для культивирования и поддержания рекомбинантных штаммов Escherichia coli, используемых в молекулярной микробиологии. Глюкозу можно добавлять по желанию.

Состав

Состав и конечное значение pH:

Формула скорректирована и стандартизирована для достижения заданных показателей эффективности.

Принцип действия

Бульон основан на исходной формуле бульона Лурия, описанной Миллером для роста и поддержания штаммов E. coli, применяемых в молекулярной микробиологии. Это богатая питательными веществами среда для выращивания чистых культур рекомбинантных штаммов.

E. coli в среде LB выращивают до поздней логарифмической фазы. Некоторые плазмидные векторы могут реплицироваться до большого числа копий без селективной амплификации. Другие векторы реплицируются менее свободно и требуют селективной амплификации. Для подавления синтеза веществ клеткой-хозяином и, как следствие, предотвращения репликации бактериальной хромосомы можно добавлять хлорамфеникол.

В модификации Миллера концентрация хлорида натрия в основе бульона Лурия составляет одну десятую и одну двадцатую от концентраций в формулах агара Лурия Леннокса и Миллера соответственно. Это позволяет подбирать оптимальную концентрацию соли для конкретного штамма. При необходимости среду можно асептически дополнить глюкозой.

Триптон обеспечивает среду пептидами и пептонами, дрожжевой экстракт — витаминами группы B. Хлорид натрия служит источником ионов натрия для мембранного транспорта и поддерживает осмотическое равновесие.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 1 капсулу в 500 мл дистиллированной или очищенной воды либо 2 капсулы в 1000 мл воды.
2. Нагрейте до кипения, чтобы полностью растворить среду.
3. Стерилизуйте в автоклаве при 121 °C в течение 15 мин и давлении 15 psi (≈0,10 МПа).
4. Охладите до 45–50 °C.
5. При необходимости добавьте 20%-й раствор глюкозы: 5 мл на 500 мл среды или 10 мл на 1000 мл.
6. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные пробирки или колбы.

Контроль качества

Внешний вид

Желатиновая капсула с гранулированной средой кремового или жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Раствор от жёлтого до янтарного цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.

Количество среды

Одна капсула содержит 7,75 г среды, достаточные для приготовления 500 мл.

Реакция и pH

Реакция 1,55%-го водного раствора при 25 °C: pH 7,0±0,2.

Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Примечание: * — соответствующий номер WDCM.

Требования к образцам и безопасность

Тип образца: рекомбинантные штаммы E. coli.

При работе с образцами рекомбинантных штаммов соблюдайте установленные правила обращения с биологическими материалами. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве до утилизации.

Перед вскрытием контейнера прочитайте маркировку. Используйте защитные перчатки, одежду, очки и средство защиты лица. При работе с образцами и культурами соблюдайте правила микробиологической лабораторной практики и стандартные меры предосторожности. Дополнительные требования безопасности приведены в паспортах безопасности.

Ограничения применения

• Из-за особенностей пищевых потребностей некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост.
• Для полной идентификации необходимо провести дополнительные биохимические и серологические тесты.

Хранение и срок годности

Храните сухую среду при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере, а приготовленную среду — при 15–25 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на маркировке.

После вскрытия плотно закрывайте контейнер и храните продукт в сухом виде. Среда гигроскопична: при ненадлежащем хранении возможно образование комков. Храните контейнер в сухом проветриваемом месте, защищённом от резких перепадов температуры и источников возгорания. После использования плотно закрывайте контейнер. Рабочие характеристики сохраняются при использовании в течение указанного срока годности и соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Утилизация