Питательная среда HiMedia SL043-25SL Среда нитратного агара — стерильный нитратный агар в пробирке со скошенной поверхностью для выявления бактерий, восстанавливающих нитраты. Среда предназначена для исследования выделенных микроорганизмов из клинических, пищевых и молочных образцов и используется только для диагностики in vitro профессиональными специалистами.

Назначение

Среда нитратного агара предназначена для выявления бактерий, восстанавливающих нитраты, по образованию нитрита, аммиака или газообразного азота. Метод особенно применим для дифференциации и идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae, а также для оценки способности невоспроизводящих брожение и других грамотрицательных палочек восстанавливать нитраты.

Состав

Формула среды, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Пептон HM B ранее обозначался как мясной экстракт B.

Методика применения

1. Асептически нанесите исследуемый инокулят штрихом на скошенную поверхность среды.
2. Инкубируйте пробирки со скошенной средой при подходящих условиях.
3. Инкубируйте посевы при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Принцип определения и интерпретация результатов

Нитратный агар приготовлен в соответствии с формулой, опубликованной в руководстве «Исследование чистых культур бактерий» Общества американских бактериологов.

Способность микроорганизмов восстанавливать нитраты используют для дифференциации и идентификации различных видов бактерий, особенно представителей семейства Enterobacteriaceae. Невоспроизводящие брожение и другие разнообразные грамотрицательные палочки отличаются по способности восстанавливать нитраты. Некоторые представители этой группы способны к денитрификации — восстановлению нитрата до газообразного азота. Для грамотрицательных палочек, сбраживающих глюкозу, образование газообразного азота из нитрата является важным дифференциальным признаком.

Нитрат калия в составе среды служит субстратом для определения восстановления нитрата бактериями. Некоторые бактерии преобразуют нитрат в нитрит, аммиак или газообразный азот.

Наличие нитритов выявляют добавлением по 0,5 мл раствора сульфаниловой кислоты (R015) и раствора альфа-нафтиламина (R009). Появление красно-фиолетовой окраски обусловлено образованием красного диазокрасителя — p-сульфобензол-азо-альфа-нафтиламина — и указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Если окрашивание не развивается, это означает, что нитрат либо не восстановлен, либо был восстановлен далее — до аммиака или газообразного азота. Для проверки добавляют в пробирку щепотку цинковой пыли. Цинк восстанавливает нитрат до нитрита, что приводит к появлению красной окраски. Появление красной окраски означает, что нитрат присутствует в среде и ранее не был восстановлен. Отсутствие красной окраски после добавления цинковой пыли означает, что нитрата в среде нет и он был восстановлен дальше стадии образования нитрита. Таким образом, восстановление нитрата подтверждается либо наличием конечного продукта катаболизма, либо отсутствием нитрата в среде.

Представители Enterobacteriaceae обычно восстанавливают нитрат до нитрита. Нитрит реагирует с сульфаниловой кислотой и N,N-диметил-1-нафтиламином с образованием красной окраски. Эта реакция называется реакцией Грисса.

Если микроорганизм быстро растёт и активно восстанавливает нитрат, тест следует выполнять после раннего периода инкубации, поскольку нитрит может быть восстановлен далее до азота.

Проведение теста на восстановление нитрата

1. В пробирку с исследуемой культурой добавьте по несколько капель каждого реагента: сульфаниловой кислоты (R015) и раствора альфа-нафтиламина (R009).
2. Отчётливая красная или розовая окраска указывает на восстановление нитрата.
3. Одновременно исследуйте контрольную неинокулированную пробирку.
4. Если розовая окраска не образуется, добавьте щепотку цинковой пыли для подтверждения отсутствия нитрата в среде.
5. Интерпретируйте результат с учётом реакции после добавления цинковой пыли: появление красной окраски указывает на наличие невосстановленного нитрата; отсутствие красной окраски указывает на дальнейшее восстановление нитрата, за пределами стадии образования нитрита.

Тип образцов

Среда предназначена для исследования выделенных микроорганизмов из:

• клинических образцов;
• пищевых образцов;
• молочных образцов.

Сбор и обращение с образцами

При работе с образцами выделенных микроорганизмов применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Технические характеристики

• Тип продукта: стерильная среда нитратного агара со скошенной поверхностью
• Форма поставки среды: стеклянная пробирка
• Количество среды: 8 мл в стеклянной пробирке
• Цвет среды: светло-янтарный
• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2
• Контрольный диапазон pH: 6,60–7,00
• Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска
• Температура хранения при получении: 2–8 °C
• Срок хранения: до даты истечения срока годности, указанной на этикетке

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее обозначался как Enterobacter aerogenes.

Условия хранения и срок годности

При получении хранить при температуре 2–8 °C.

Использовать до даты истечения срока годности, указанной на этикетке. Рабочие характеристики продукта обеспечиваются при использовании в течение установленного срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения метода

• Восстановление нитрата не является подтверждающим тестом. Полная идентификация бактерий должна включать оценку морфологии, окраски по Граму, биохимические и серологические тесты.
• Добавление избыточного количества цинка может привести к ложноотрицательной реакции.
• При проведении теста на восстановление нитрата с альфа-нафтиламином окраска, образующаяся при положительной реакции, может быстро исчезать.

Контроль качества

Внешний вид

Стерильная среда нитратного агара со скошенной поверхностью в стеклянной пробирке.

Цвет

Среда светло-янтарного цвета.

Количество среды

8 мл среды в стеклянной пробирке.

Проверка стерильности

Соответствует критериям выпуска.

pH

6,60–7,00.

Оценка рабочих характеристик

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с указаниями на этикетке, в течение срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При