Питательная дифференциально-диагностическая среда HiMedia SL043-10SL Среда нитратного агара для выявления бактерий, восстанавливающих нитраты, с конечным pH 6,8 ± 0,2. Среда применяется для исследования изолированных микроорганизмов из клинических, пищевых и молочных образцов; хранение при получении — при 2–8 °C.

Назначение

Среда предназначена для выявления бактерий, восстанавливающих нитраты, и дифференциации различных групп микроорганизмов, особенно представителей семейства Enterobacteriaceae.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с рабочими характеристиками среды. Пептон HM B ранее обозначался как мясной экстракт B.

Принцип и интерпретация

Нитратный агар приготовлен в соответствии с формулой, опубликованной в руководстве Society of American Bacteriologist «Исследование чистых культур бактерий». Способность микроорганизмов восстанавливать нитраты используется для дифференциации и идентификации различных бактерий, особенно представителей семейства Enterobacteriaceae. Неферментирующие и другие грамотрицательные палочки различаются по способности восстанавливать нитраты.

Некоторые микроорганизмы способны к денитрификации — восстановлению нитрата до газообразного азота. Для грамотрицательных палочек, ферментирующих глюкозу, образование газообразного азота из нитрата является важным дифференциальным признаком.

Нитрат калия в составе среды служит субстратом для определения восстановления нитратов бактериями. Некоторые бактерии преобразуют нитрат в нитрит, аммиак или газообразный азот.

Наличие нитритов выявляют добавлением по 0,5 мл раствора сульфаниловой кислоты (R015) и раствора α-нафтиламина (R009). Появление красно-фиолетового окрашивания обусловлено образованием красного диазокрасителя — п-сульфобензол-азо-α-нафтиламина — и указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Если окрашивание не появляется, это означает, что нитрат либо не восстановлен, либо восстановление продолжилось до аммиака или газообразного азота. Результат проверяют добавлением щепотки цинковой пыли в пробирку:

• цинк восстанавливает нитрат до нитрита, что приводит к появлению красного окрашивания;
• появление красного окрашивания означает, что нитрат присутствует в среде и ранее не был восстановлен;
• отсутствие красного окрашивания после добавления цинковой пыли означает, что нитрата в среде нет и восстановление прошло дальше стадии образования нитрита.

Таким образом, восстановление нитратов подтверждается либо наличием конечного продукта катаболизма, либо отсутствием нитрата в среде.

Представители семейства Enterobacteriaceae обычно восстанавливают нитрат до нитрита. Нитрит реагирует с сульфаниловой кислотой и N,N-диметил-1-нафтиламином с образованием красного окрашивания. Реакция называется реакцией Грисса.

Если микроорганизм быстро растёт и активно восстанавливает нитрат, исследование следует проводить после раннего периода инкубации, поскольку нитрит может восстанавливаться далее до газообразного азота.

Методика проведения анализа

1. Асептически выполните посев исследуемого инокулята штрихом на скошенную поверхность среды.
2. Инкубируйте пробирки со скошенной средой при соответствующих условиях.
3. Стандартный режим инкубации: 35–37 °C в течение 18–24 ч.
4. Добавьте в пробирку с исследуемой культурой несколько капель раствора сульфаниловой кислоты (R015) и раствора α-нафтиламина (R009).
5. Чёткое красное или розовое окрашивание указывает на восстановление нитрата.
6. Одновременно исследуйте контрольную неинокулированную пробирку.
7. Если розовое окрашивание не образуется, добавьте щепотку цинковой пыли для подтверждения отсутствия нитрата в среде.
8. При необходимости учитывайте ранний период инкубации для быстрорастущих микроорганизмов, активно восстанавливающих нитраты.

Тип образцов

• Изолированные микроорганизмы из клинических образцов.
• Изолированные микроорганизмы из пищевых и молочных образцов.

Сбор и обращение с образцами

Для образцов изолированных микроорганизмов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным лабораторным руководствам.

После использования контаминированные материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее обозначался как Enterobacter aerogenes.

Контроль качества

• Внешний вид: стерильный скошенный нитратный агар в стеклянной пробирке.
• Цвет: светло-янтарная среда.
• Объём среды: 8 мл в стеклянной пробирке.
• Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.
• pH: 6,60–7,00.

Условия хранения и срок годности

• Условия хранения при получении: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• Рабочие характеристики среды гарантируются при использовании в течение установленного срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Ограничения метода

• Восстановление нитратов не является подтверждающим тестом.
• Полная идентификация бактерий должна включать исследование морфологии, окраски по Граму, биохимические и серологические тесты.
• Добавление избыточного количества цинка может привести к ложноотрицательной реакции.
• При проведении теста на восстановление нитратов с α-нафтиламином окрашивание, возникающее при положительной реакции, может быстро исчезать.

Меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.
• Материалы, использованные или ставшие непригодными, необходимо безопасно утилизировать автоклавированием и/или сжиганием.
• Утилизацию инфекционных материалов выполняйте в соответствии с действующими лабораторными процедурами.
• Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы согласно действующим лабораторным методикам.

Оценка рабочих характеристик

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с указаниями на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.