Среда Левенштейна–Йенсена с противотуберкулезными препаратами 2 ряда HiMedia SL024 (10 фл.)

Микробиологическая питательная среда «Среда Левенштейна–Йенсена с противотуберкулезными препаратами 2 ряда HiMedia SL024 (10 фл.)» производства HiMedia содержит восемь противотуберкулезных препаратов и два контрольных образца. Среда предназначена для определения лекарственной чувствительности M. tuberculosis при прямом исследовании деконтаминированной мокроты или косвенном исследовании чистой культуры, при хранении требуется температура 2–8 °C.

Назначение

Среда HiMedia SL024 применяется для определения чувствительности M. tuberculosis к противотуберкулезным препаратам второго ряда:

• канамицин;
• амикацин;
• этионамид;
• D-циклосерин;
• кларитромицин;
• ципрофлоксацин;
• п-аминосалициловая кислота;
• рифабутин.

Набор содержит восемь противотуберкулезных препаратов и два контрольных образца.

Состав

Состав: фирменная рецептура производителя.

Методика проведения теста на лекарственную чувствительность

Работу с культурами и образцами микобактерий выполняют с соблюдением правил лабораторной безопасности:

• все операции проводят в боксе биологической безопасности;
• для инокуляции используют калиброванную петлю или микропипетку;
• перед утилизацией все образцы и использованные пробирки со скошенной средой погружают в подходящий дезинфицирующий раствор или, предпочтительно, в 2%-ный раствор глутарового альдегида минимум на 2 ч.

Тест на лекарственную чувствительность проводят одним из двух способов:

1. Прямой тест: используют образец мокроты, предварительно подвергнутый деконтаминации и концентрированию. На поверхность скошенной среды вносят 10 мкл обработанного образца.
2. Косвенный тест: используют чистую культуру микобактерий, выделенную из клинического образца.

Подготовка инокулюма

1. В асептических условиях отберите петлей материал из роста M. tuberculosis, предварительно выделенного на скошенной среде Левенштейна–Йенсена.
2. Суспендируйте образец в 1,0 мл стерильной дистиллированной воды во флаконе с завинчивающейся крышкой.
3. Для лучшей гомогенизации и разрушения скоплений клеток рекомендуется использовать стеклянные шарики диаметром 3,0 мм.
4. Дополнительно гомогенизируйте смесь на встряхивателе типа «вортекс» до 10 мин.
5. Оставьте суспензию в покое на 10 мин, не открывая флакон.
6. После выдерживания откорректируйте мутность суспензии по стандарту Мак-Фарланда 0,5 с использованием физиологического раствора. Полученная суспензия должна содержать приблизительно 1,5 × 10⁸ КОЕ/мл.
7. Разведите полученную суспензию в соотношении 1:10 000.

Принцип и интерпретация

Метод основан на корреляции in vitro между клиническим ответом на противомикробный препарат и результатом исследования лекарственной чувствительности in vitro с использованием набора SL023. Полученный профиль чувствительности M. tuberculosis используют для диагностики чувствительности у пациента и последующего выбора лечения и лекарственной терапии.

Первичная лекарственная устойчивость M. tuberculosis — это устойчивость к противомикробному препарату у микроорганизма, выделенного от пациента, который ранее не получал противотуберкулезную терапию. В таком случае лекарственная устойчивость относится к ранее не леченным пациентам, у которых выявлены устойчивые микроорганизмы, предположительно приобретенные из внешнего источника устойчивого M. tuberculosis.

Приобретенная, или вторичная, лекарственная устойчивость связана главным образом с несоблюдением режима приема препаратов.

Тест на чувствительность микобактерий можно инокулировать непосредственно из переваренной и концентрированной мазкоположительной мокроты либо из чистой культуры микобактерий, выделенной из клинического образца:

• прямой тест обычно выполняют только для образцов, в которых микобактерии обнаружены при микроскопическом исследовании мазка; наилучшие результаты получают при наличии большого количества микобактерий;
• преимущество прямого теста заключается в возможности получить результат исследования чувствительности значительно раньше — через 3–4 недели;
• косвенный тест может занимать до 5–7 недель;
• прямой тест может осложняться зарастанием другими бактериями, пережившими процедуру деконтаминации.

Контроль качества

Внешний вид

Гладкие скошенные среды бледного голубовато-зеленого цвета, содержащие восемь противотуберкулезных препаратов — канамицин, амикацин, этионамид, D-циклосерин, кларитромицин, ципрофлоксацин, п-аминосалициловую кислоту и рифабутин — и два контрольных образца.

Тест на стерильность

Соответствует критериям выпуска.

Культуральная реакция

Культуральную реакцию оценивают после инкубации при 35–37 °C в атмосфере с содержанием CO₂ 5–10 % в течение 2–4 недель; дополнительный рост может наблюдаться в течение 6–8 недель.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• Условия обращения с культурами и использованными средами: перед утилизацией выдерживать образцы и использованные скошенные среды в подходящем дезинфицирующем растворе или предпочтительно в 2%-ном растворе глутарового альдегида не менее 2 ч.

Технические особенности методики

Прямой вариант исследования позволяет получить результат через 3–4 недели, тогда как косвенный вариант исследования чистой культуры может занимать до 5–7 недель; прямой вариант ограничен риском зарастания другими бактериями, сохранившимися после деконтаминации.