Среда Левенштейна–Йенсена с противотуберкулезными препаратами 1 ряда HiMedia SL023 (7 фл.)

Среда Левенштейна–Йенсена с противотуберкулезными препаратами 1 ряда HiMedia SL023 (7 фл.) производства HiMedia. Предназначена для определения чувствительности M. tuberculosis к пяти основным антибиотикам (изониазид, стрептомицин, этамбутол, рифампицин, пиразинамид).

Принцип измерения и интерпретация

Методика основана на корреляции между клиническим ответом организма на противомикробный агент и результатами тестирования чувствительности in vitro. Набор SL023 позволяет диагностировать паттерн чувствительности возбудителя у пациента для подбора соответствующей лекарственной терапии.

Различают два типа резистентности:

• Первичная лекарственная устойчивость: устойчивость организма, выделенного у пациента, который ранее не получал противотуберкулезную терапию (вероятно, заражение из внешнего источника резистентным штаммом).
• Приобретенная (вторичная) лекарственная устойчивость: возникает, в том числе, вследствие несоблюдения режима приема препаратов.

Область применения

Среда используется для анализа клинических образцов (мокроты). Тестирование чувствительности может проводиться двумя способами:

1. Прямой тест: инокуляция непосредственно из перевариваемой и концентрированной мокроты с положительным мазком. Преимущество — сокращение срока получения результата до 3–4 недель (вместо 5–7 недель при косвенном методе), однако возможен избыточный рост других бактерий, выживших после деконтаминации.
2. Косвенный тест: инокуляция чистой культуры Mycobacteria, выделенной из клинического образца.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Асептически взять петлю роста M. tuberculosis, предварительно выделенного на скошенной среде Левенштейна–Йенсена.
2. Суспендировать образец в 1,0 мл стерильной дистиллированной воды в бутылочке с завинчивающейся крышкой. Для лучшей гомогенизации и деагрегации клеток рекомендуется использовать стеклянные шарики диаметром 3,0 мм.
3. Гомогенизировать смесь на вортекс-смесителе до 10 минут.
4. Перед открытием бутылки выдержать суспензию в состоянии покоя 10 минут.
5. Довести мутность суспензии до соответствия стандарту МакФарланда 0,5 с помощью физиологического раствора (примерно 1,5 × 10⁸ КОЕ/мл).
6. Развести полученную суспензию в соотношении 1:10 000.

Процедура посева

Все работы должны выполняться в боксе биологической безопасности с соблюдением правил работы с культурами микобактерий.

1. Для инокуляции использовать калиброванную петлю или микропипетку.
2. В зависимости от метода:
   • При прямом тесте: нанести 10 мкл обработанного образца на скосы.
   • При косвенном тесте: использовать подготовленный инокулят чистой культуры.

Контроль качества и культурные характеристики

Внешний вид

Скосы бледно-голубого зеленого цвета с гладкой поверхностью. Содержат пять противотуберкулезных препаратов (изониазид, стрептомицин, этамбутол, рифампицин, пиразинамид) при pH 5,5, а также два контрольных скоса.

Культуральный ответ

Инкубация проводится при температуре 35–37 °C в атмосфере с содержанием CO₂ 5–10 % в течение 2–4 недель (в некоторых случаях рост может наблюдаться до 6–8 недель).

Характеристики роста при инкубации при 35–37 °C (5–10 % CO₂):

Ограничения применения

1. На среде могут расти некоторые грамположительные контаминанты (например, Streptococci) и грамотрицательные бациллы.
2. Возможен рост некоторых сапрофитов.
3. Протеолитические контаминанты могут вызвать локальное или полное переваривание среды.
4. Для окончательного подтверждения необходимо проведение дополнительных биохимических и серологических исследований.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: при получении хранить при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.
• Утилизация: использованные или непригодные препараты подлежат обязательному автоклавированию и/или сжиганию. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть деконтаминированы (рекомендуется погружение в 2 % глутаральдегид минимум на два часа) перед утилизацией.

Меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro. Только для профессионального использования.
• Использовать средства индивидуальной защиты: защитные перчатки, спецодежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности при работе с клиническими образцами.