Среда Левенштейна–Йенсена с противотуберкулезными препаратами 1 ряда HiMedia SL023 (7 фл.)

Питательная диагностическая среда «Среда Левенштейна–Йенсена с противотуберкулезными препаратами 1 ряда HiMedia SL023 (7 фл.)» предназначена для определения чувствительности Mycobacterium tuberculosis к изониазиду, стрептомицину, этамбутолу, рифампицину и пиразинамиду. Среда применяется при исследовании мокроты и чистых культур микобактерий методом лекарственной чувствительности; результат требует дальнейшей биохимической и серологической идентификации, поскольку на среде могут расти загрязняющие микроорганизмы и сапрофиты.

Назначение и область применения

Среда HiMedia SL023 используется для тестирования лекарственной чувствительности микобактерий, прежде всего M. tuberculosis, выделенных из клинических образцов.

Тип образца

• Клинический образец: мокрота.

Варианты постановки теста

Тест на чувствительность микобактерий можно инокулировать:

• непосредственно из деконтаминированной и концентрированной мазкоположительной мокроты — прямой тест;
• из чистой культуры микобактерий, выделенной из клинического образца, — непрямой тест.

Прямой тест обычно выполняют только для образцов, в которых микобактерии обнаружены при микроскопии мазка. Наилучшие результаты получают при наличии большого количества микобактерий.

Преимущество прямого теста заключается в более раннем получении результата исследования чувствительности: через 3–4 недели. При непрямом тесте результат может быть получен через 5–7 недель. Прямой тест может осложняться избыточным ростом других бактерий, сохранившихся после процедуры деконтаминации.

Принцип и интерпретация

Метод основан на корреляции in vitro между клиническим ответом на противомикробный препарат и результатом тестирования чувствительности in vitro с использованием набора SL023. Полученные данные позволяют определить профиль чувствительности M. tuberculosis у пациента и выбрать соответствующую лекарственную терапию.

Первичная лекарственная устойчивость M. tuberculosis определяется как устойчивость к противомикробному препарату у микроорганизма, выделенного от пациента, который ранее не получал противотуберкулезную терапию. В таком случае лекарственная устойчивость относится к ранее нелеченным пациентам, у которых выявлены устойчивые микроорганизмы, предположительно приобретенные при заражении из внешнего источника устойчивого M. tuberculosis.

Приобретенная, или вторичная, лекарственная устойчивость в основном связана с несоблюдением режима приема препаратов.

Методика проведения теста

Подготовка к работе

1. Работу с культурами и образцами микобактерий выполняйте с соблюдением надлежащих лабораторных процедур.
2. Все операции проводите в боксе биологической безопасности.
3. Для инокуляции используйте калиброванную петлю или микропипетку.
4. Образцы и использованные пробирки со скошенной средой перед утилизацией погрузите в подходящий дезинфицирующий раствор или, предпочтительно, в 2%-ный глутаровый альдегид не менее чем на 2 ч.
5. После использования загрязненные материалы перед выбрасыванием стерилизуйте автоклавированием.

Инокуляция обработанной мокроты

Для прямого теста используйте мокроту, предварительно подвергнутую деконтаминации и концентрированию.

1. Нанесите 10 мкл обработанного образца на поверхность скошенной среды.

Подготовка посевного материала из чистой культуры

Для непрямого теста используйте чистую культуру микобактерий, выделенную из клинического образца.

1. Асептически отберите петлю материала из культуры M. tuberculosis, предварительно выделенной на скошенной среде Левенштейна–Йенсена.
2. Суспендируйте материал в 1,0 мл стерильной дистиллированной воды во флаконе с завинчивающейся крышкой.
3. Для лучшей гомогенизации и разрушения скоплений клеток рекомендуется использовать стеклянные шарики диаметром 3,0 мм.
4. Дополнительно гомогенизируйте смесь на вихревом смесителе в течение до 10 мин.
5. Перед открыванием флакона выдержите его в покое 10 мин.
6. Скорректируйте мутность суспензии по стандарту МакФарланда 0,5 с использованием физиологического раствора. Ожидаемая концентрация составляет приблизительно 1,5 × 10⁸ КОЕ/мл.
7. Разведите полученную суспензию в соотношении 1:10 000.

Культуральные характеристики и контроль качества

Внешний вид

Скошенная среда имеет бледный голубовато-зеленый цвет и гладкую поверхность. Среда содержит пять противотуберкулезных препаратов: изониазид, стрептомицин, этамбутол, рифампицин и пиразинамид; значение pH среды с препаратами составляет 5,5. В набор также входят два контрольных скоса.

Условия оценки культуральной реакции

Культуральную реакцию оценивают после инкубации при 35–37 °C в атмосфере с содержанием CO₂ 5–10 % в течение 2–4 недель. Дальнейший рост может наблюдаться в течение 6–8 недель.

Проверка стерильности

Среда соответствует критериям выпуска по результатам проверки стерильности.

Культуральная реакция

Ограничения применения

1. На среде могут расти некоторые грамположительные загрязнители, например стрептококки, и грамотрицательные палочки.
2. На среде также могут расти некоторые сапрофиты.
3. Протеолитические загрязнители вызывают локальное или полное разжижение среды.
4. Для подтверждения необходима дальнейшая биохимическая и серологическая идентификация.

Условия эксплуатации, хранения и утилизации

Хранение

• Температура хранения: 2–8 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• Рабочие характеристики среды оптимальны при использовании в течение установленного срока годности.

Меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила микробиологической безопасности при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов путем автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническим образцом, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.