HiMedia SL023-1KT Набор первой линии для туберкулеза (всего 7 косяков) (1 набор)

Набор питательных сред HiMedia SL023-1KT Набор первой линии для туберкулеза (всего 7 косяков) (1 набор) предназначен для определения лекарственной чувствительности M. tuberculosis и включает 7 скошенных сред, в том числе среды с пятью противотуберкулезными препаратами и два контрольных косяка. Набор применяют для анализа деконтаминированной и концентрированной мокроты или чистой культуры микобактерий; прямой метод позволяет получить результат через 3–4 недели, а непрямой — через 5–7 недель.

Назначение

Набор используют для проведения теста лекарственной чувствительности M. tuberculosis:

• непосредственно из предварительно деконтаминированной и концентрированной мокроты;
• из чистой культуры микобактерий, выделенной из клинического образца.

Тип клинического образца: мокрота.

Набор предназначен только для диагностики in vitro и профессионального применения.

Принцип анализа и интерпретация

Метод основан на корреляции между клиническим ответом на противомикробный препарат и результатом исследования лекарственной чувствительности in vitro. Результат теста помогает определить профиль чувствительности M. tuberculosis у пациента и выбрать соответствующую лекарственную терапию.

Первичная лекарственная устойчивость M. tuberculosis — устойчивость к противомикробному препарату у микроорганизма, выделенного от пациента, который ранее не получал противотуберкулезную терапию. В этом случае лекарственная устойчивость относится к ранее не лечившимся пациентам, у которых выявлены устойчивые микроорганизмы, предположительно приобретенные из внешнего источника устойчивого M. tuberculosis.

Приобретенная, или вторичная, лекарственная устойчивость связана преимущественно с несоблюдением режима приема препаратов.

Методика проведения анализа

Требования к работе с микобактериями

1. При работе с культурами и образцами микобактерий соблюдайте надлежащие лабораторные процедуры.
2. Все манипуляции выполняйте в боксе биологической безопасности.
3. Для инокуляции используйте калиброванную петлю или микропипетку.
4. Перед утилизацией погрузите все образцы и использованные косяки в подходящий дезинфицирующий раствор, предпочтительно 2 % раствор глутарового альдегида, минимум на 2 ч.

Варианты постановки теста лекарственной чувствительности

Тест выполняют одним из двух способов:

1. Прямой тест: используйте образец мокроты, предварительно подвергнутый деконтаминации и концентрированию; инокулируйте на косяки 10 мкл обработанного образца.
2. Непрямой тест: используйте чистую культуру микобактерий, выделенную из клинического образца.

Подготовка посевной суспензии

1. В асептических условиях отберите петлей часть роста M. tuberculosis, предварительно выделенного на косяке среды Лёвенштейна–Йенсена (L. J.).
2. Суспендируйте образец в 1,0 мл стерильной дистиллированной воды во флаконе с завинчивающейся крышкой.
3. Для более эффективной гомогенизации и разрушения скоплений клеток рекомендуется использовать стеклянные шарики диаметром 3,0 мм.
4. Дополнительно гомогенизируйте смесь на вихревом смесителе в течение 10 мин.
5. Оставьте суспензию в покое на 10 мин, не открывая флакон.
6. После выдержки скорректируйте оптическую плотность суспензии физиологическим раствором до соответствия стандарту Мак-Фарланда 0,5; ориентировочная концентрация составляет 1,5 × 10⁸ КОЕ/мл.
7. Разведите полученную суспензию в соотношении 1:10000.

Качество и контрольные характеристики

Внешний вид

Среды представляют собой гладкие косяки бледного голубовато-зелёного цвета. Пять косяков содержат противотуберкулезные препараты:

• изониазид;
• стрептомицин;
• этамбутол;
• рифампицин;
• пиразинамид.

Значение pH сред с противотуберкулезными препаратами: 5,5.

Также в набор входят два контрольных косяка.

Условия оценки культуральных характеристик

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в атмосфере с содержанием CO₂ 5–10 % в течение 2–4 недель. Дополнительный рост может наблюдаться через 6–8 недель.

Проверка стерильности

Результат: соответствует критериям выпуска.

Культуральная реакция

Пробоподготовка и обращение с образцами

Микобактериологический тест на лекарственную чувствительность можно инокулировать непосредственно из переваренной и концентрированной мазкоположительной мокроты или из чистой культуры микобактерий, выделенной из клинического образца.

Прямой тест обычно выполняют только для образцов, в которых микобактерии обнаружены при микроскопическом исследовании мазка. Наилучшие результаты получают при наличии большого количества микобактерий.

Преимущество прямого теста — более раннее получение отчета о лекарственной чувствительности: через 3–4 недели по сравнению с непрямым тестом, который может занимать до 5–7 недель. Прямой тест может быть осложнен избыточным ростом других бактерий, сохранившихся после процедуры деконтаминации.

После использования загрязненные материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения метода

1. На среде могут расти некоторые грамположительные загрязнители, например стрептококки, а также грамотрицательные палочки.
2. На среде могут расти некоторые сапрофиты.
3. Протеолитические загрязнители вызывают локальное или полное разрушение среды.
4. Для подтверждения необходима дополнительная биохимическая и серологическая идентификация.

Предупреждения и меры предосторожности

• Использовать только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте надлежащие правила микробиологической лаборатории.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.
• Материалы, контактировавшие с клиническим образцом, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными процедурами.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения после получения: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• Рабочие характеристики сохраняются при использовании в течение установленного срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Утилизация

Использованные или непригодные к применению компоненты набора необходимо безопасно утилизировать автоклавированием и/или сжиганием.

Утилизацию инфекционных материалов выполняйте в соответствии с установленными лабораторными процедурами. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы с применением действующих методов лабораторной безопасности.