HiMedia MV395-500G OF базальная HiVeg среда

Микробиологическая питательная среда HiMedia MV395-500G OF базальная HiVeg для дифференциации грамотрицательных бактерий по окислительному и ферментативному метаболизму углеводов, масса упаковки 500 г. Среда применяется для исследования утилизации углеводов в аэробных и анаэробных условиях; результат зависит от pH, а для требовательных микроорганизмов может потребоваться добавление сыворотки или дрожжевого экстракта.

Назначение

Среда рекомендована для дифференциации грамотрицательных бактерий на основании ферментативного и окислительного метаболизма углеводов.

Тип образца: выделенные микроорганизмы из клинических и неклинических образцов.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Принцип действия и интерпретация результатов

Среда OF разработана Hugh и Leifson для изучения окислительного и ферментативного метаболизма углеводов грамотрицательными бактериями. Этот критерий используют при таксономических исследованиях представителей семейства Enterobacteriaceae.

Гидролизат HiVeg® обеспечивает среду углеродом, азотом, витаминами и другими компонентами, необходимыми для роста бактерий. В базальной среде OF HiVeg® вместо пептонов животного происхождения применяются растительные пептоны, благодаря чему среда не содержит рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (BSE/TSE).

Углевод, ферментацию которого необходимо исследовать, добавляют отдельно. Фосфат выполняет функцию буфера, а низкая концентрация агара определяет подвижность бактерий и способствует равномерному распространению кислоты, образующейся на поверхности среды. Бромтимоловый синий используется как индикатор pH.

Низкая концентрация агара позволяет определять подвижность и способствует равномерному распределению кислоты, образующейся на поверхности среды. Подвижность проявляется в виде диффузной зоны, расширяющейся от линии посева. Неподвижные микроорганизмы растут вдоль линии посева.

Декстроза является наиболее важным углеводом для использования в базальной среде OF HiVeg®. Однако некоторые микроорганизмы способны метаболизировать другие углеводы, даже если не используют декстрозу. Разложение углевода с образованием кислоты выявляется по изменению цвета индикатора бромтимолового синего на жёлтый.

Окислительная утилизация происходит при контакте среды с воздухом, а ферментативная утилизация — при исключении доступа воздуха.

Для дифференциальной оценки используют две пробирки с одной и той же углеводсодержащей средой: одну пробирку покрывают минеральным маслом для исключения кислорода, вторую оставляют открытой. Ферментативные микроорганизмы вызывают кислую реакцию как в покрытой, так и в открытой среде. Окислительные микроорганизмы вызывают кислую реакцию в открытой среде, а в покрытой среде дают слабый рост без изменения среды. Микроорганизмы, которые не относятся ни к окислительным, ни к ферментативным, не изменяют покрытую среду и вызывают щелочную реакцию в открытой среде.

Кислая реакция у окислительных микроорганизмов более выражена на поверхности среды, откуда постепенно распространяется по всему объёму. При слабой или медленной окислительной реакции первоначальная щелочная реакция на поверхности открытой пробирки может сохраняться в течение нескольких суток и в дальнейшем сменяться кислой реакцией.

Базальную среду OF можно дополнить 2 % сыворотки или 0,1 % дрожжевого экстракта для повышения питательности и улучшения роста бактерий.

Методика приготовления и проведения анализа

1. Суспендируйте 9,38 г среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Разлейте среду порциями по 100 мл.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. В первые 100 мл стерильной базальной среды асептически добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора декстрозы.
6. Во вторые 100 мл стерильной базальной среды асептически добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора лактозы.
7. В третьи 100 мл стерильной базальной среды асептически добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора сахарозы.
8. Перемешайте среды и асептически разлейте по 5 мл в стерильные пробирки, готовя по две пробирки для аэробной и анаэробной ферментации.
9. Подготовьте среду с 1 % декстрозы и без 1 % декстрозы.
10. Для каждого углевода используйте по две пробирки на один микроорганизм. Инокулируйте среды уколом по линии посева.
11. Одну инокулированную пробирку с каждым углеводом покройте 2 мл стерильного минерального масла. Вторую пробирку оставьте открытой.
12. Инкубируйте пробирки при 35–37 °C в течение 18–48 ч или дольше.
13. Считывайте результаты через 48 ч.

Пробоподготовка, сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным руководствам.

Для пищевых продуктов и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Цвет: от кремового до зеленовато-жёлтого.

Форма: однородный, сыпучий порошок без комков.

Желирование

Полужидкая среда, сопоставимая с 0,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель зелёного цвета.

Реакция среды

Реакция 0,94%-ного водного раствора при 25 °C.

pH: 6,8 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.