HiMedia MV395-100G OF базальная HiVeg среда

Питательная среда «HiMedia MV395-100G OF базальная HiVeg среда» производства HiMedia — порошковая среда с конечным pH 6,8 ± 0,2. Применяется для дифференциации грамотрицательных бактерий по окислительному и ферментативному метаболизму углеводов, включая аэробные и анаэробные условия культивирования.

Назначение

Среда рекомендована для дифференциации грамотрицательных бактерий на основании ферментативного и окислительного метаболизма углеводов.

Тип образца: изолированные микроорганизмы, полученные из клинических и не клинических образцов.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия рабочим параметрам.

Принцип измерения и интерпретация

Среда OF разработана Hugh и Leifson для изучения окислительного и ферментативного метаболизма углеводов грамотрицательными бактериями. Этот критерий используют при таксономических исследованиях семейства Enterobacteriaceae.

Гидролизат HiVeg® обеспечивает среду углеродом, азотом, витаминами и другими компонентами, необходимыми для роста бактерий. В базальной среде OF HiVeg® растительные пептоны используются вместо пептонов животного происхождения, благодаря чему среда не связана с рисками BSE/TSE.

Углевод, реакцию ферментации которого необходимо исследовать, добавляют отдельно. Фосфат выполняет буферную функцию, а низкая концентрация агара определяет подвижность бактерий и способствует распространению кислоты, образующейся на поверхности среды. Бромтимоловый синий используется как индикатор pH.

Низкая концентрация агара позволяет определять подвижность микроорганизмов и способствует равномерному распределению кислоты, образующейся на поверхности среды. Подвижность проявляется в виде диффузной зоны, расширяющейся от линии посева. Неподвижные микроорганизмы растут вдоль линии посева.

Декстроза является наиболее важным углеводом для использования в базальной среде OF HiVeg®. Однако некоторые микроорганизмы способны метаболизировать другие углеводы, даже если не используют декстрозу.

Разложение углевода с образованием кислоты определяется по изменению цвета индикатора бромтимолового синего на жёлтый. Окислительное использование углевода происходит при контакте среды с воздухом, а ферментативное использование — в условиях исключения воздуха.

Для дифференциальной оценки реакции грамотрицательный микроорганизм засевают в две пробирки с одинаковым углеводом: одну пробирку покрывают минеральным маслом для исключения кислорода, вторую оставляют открытой.

• Ферментативные микроорганизмы вызывают кислую реакцию как в покрытой, так и в открытой среде.
• Окислительные микроорганизмы вызывают кислую реакцию в открытой среде, а в покрытой среде дают слабый рост без изменения цвета.
• Микроорганизмы, которые не относятся ни к окислительным, ни к ферментативным, не изменяют покрытую среду и вызывают щелочную реакцию в открытой среде.

Инкубацию проводят при 35–37 °C в течение 18–48 ч или дольше. Результаты оценивают через 48 ч.

Кислая реакция у окислительных микроорганизмов более заметна на поверхности среды, откуда постепенно распространяется по всему объёму. При слабой или медленной окислительной реакции первоначальная щелочная реакция на поверхности открытой пробирки может сохраняться несколько дней и впоследствии перейти в кислую реакцию.

Для повышения питательности и стимуляции роста бактерий базальную среду OF можно дополнить 2 % сыворотки или 0,1 % дрожжевого экстракта.

Методика приготовления и проведения анализа

1. Суспендируйте 9,38 г среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду порциями по 100 мл.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм, ориентировочно 0,10 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
5. В первые 100 мл стерильной базальной среды асептически добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора декстрозы.
6. Во вторые 100 мл добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора лактозы.
7. В третьи 100 мл добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора сахарозы.
8. Перемешайте среды и асептически разлейте по 5 мл в стерильные пробирки в двух повторностях для исследования ферментации в аэробных и анаэробных условиях.
9. При необходимости подготовьте среду с 1 % декстрозы и без 1 % декстрозы.
10. Для каждого углевода используйте по две пробирки на один микроорганизм.
11. Внесите посевной материал уколом по линии инокуляции.
12. Одну засеянную пробирку с каждой углеводной средой покройте 2 мл стерильного минерального масла, вторую пробирку оставьте открытой.
13. Инкубируйте пробирки при 35–37 °C в течение 18–48 ч или дольше.
14. Оцените результаты через 48 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до зеленовато-жёлтого цвета, без комков.

Гелеобразование

Гелеобразование: полужидкая среда, сопоставимая с 0,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: в пробирках образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель зелёного цвета.

Реакция и pH

Реакция: реакция 0,94%-ного водного раствора при 25 °C.

pH раствора: 6,8 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.