HiMedia MV1540A-500G HiCrome агар для листерий Оттавиани-Агости, HiVeg

Питательная среда HiMedia MV1540A-500G HiCrome агар для листерий Оттавиани–Агости, HiVeg в форме порошка предназначена для селективного и дифференциального выделения Listeria monocytogenes. Среда применяется для анализа пищевых продуктов, кормов и образцов окружающей среды в зонах производства и обращения пищевой продукции; масса упаковки составляет 500 г, температура хранения — 15–25 °C.

Назначение

Среда предназначена для селективного и дифференциального выделения Listeria monocytogenes из пищевых продуктов, кормов для животных и образцов окружающей среды в зонах производства и обращения пищевой продукции.

В рецептуре HiVeg животные пептоны полностью заменены растительными пептонами. Среда основана на рецептуре Оттавиани–Агости для выделения L. monocytogenes, принятой комитетом ISO; методика также рекомендована APHA и FDA-BAM как фактическая основа метода.

Принцип действия и интерпретация результатов

Listeria monocytogenes — грамположительный возбудитель пищевых инфекций человека, способный вызывать тяжёлые инфекции у беременных женщин, включая выкидыш, мертворождение и неонатальный листериоз, а также менингит или первичную бактериемию у взрослых и детей.

Патогенность Listeria ivanovii для человека остаётся неопределённой. L. monocytogenes и L. innocua имеют сходные биохимические свойства и не могут быть надёжно дифференцированы на традиционных средах PALCAM и Oxford.

Принцип действия среды:

• пептон HiVeg № 1, гидролизат HiVeg и дрожжевой экстракт обеспечивают азотистые и углеродистые соединения, аминокислоты с длинной цепью, витамины и другие необходимые питательные вещества;
• пируват натрия обеспечивает дополнительные питательные вещества, необходимые для роста;
• глюкоза, или декстроза, является сбраживаемым углеводом;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• фосфат выполняет буферную функцию;
• хлорид лития и селективные добавки FD212A подавляют сопутствующую микрофлору и обеспечивают рост видов Listeria;
• виды Listeria гидролизуют хромогенный субстрат 5-бром-4-хлор-3-индолил-β-D-глюкопиранозид с образованием колоний сине-зелёного цвета;
• дифференциация L. monocytogenes от других видов Listeria основана на активности фосфатидилинозитол-специфичной фосфолипазы C (PIPLC);
• фосфолипаза C гидролизует очищенный субстрат FD214, внесённый в среду, в результате чего вокруг колоний L. monocytogenes формируется непрозрачный ореол.

Среда HiCrome агар для листерий Оттавиани–Агости, HiVeg подготовлена с полной заменой пептона животного происхождения на растительные пептоны для исключения рисков, связанных с BSE/TSE, возникающих при использовании животных пептонов.

Состав

Состав среды по спецификации ISO 11290 и FDA-BAM

Агар Listeria по Оттавиани и Агости; формула приведена по спецификации ISO 11290 / FDA-BAM.

Состав MV1540A HiCrome агар для листерий Оттавиани–Агости, HiVeg

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Пептон HiVeg № 1 эквивалентен ферментативному перевару тканей животного происхождения. Гидролизат HiVeg эквивалентен ферментативному перевару казеина.

Добавки после автоклавирования

Селективная добавка I

Селективная добавка OA Selective Supplement FD212A-2

Обогащающая добавка II

Обогащающая добавка LP Enrichment Supplement 1 FD214

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 36,02 г порошка в 465 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 psi (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте стерильное содержимое одного флакона обогащающей добавки LP Enrichment Supplement 1 (FD214).
6. Добавьте стерильное регидратированное содержимое селективной добавки OA Selective Supplement (FD212A).
7. Тщательно перемешайте.
8. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Исследуемые образцы

Типы образцов:

• пищевые продукты;
• корма для животных;
• образцы окружающей среды в зонах производства и обращения пищевой продукции.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых продуктов, кормов и образцов окружающей среды применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами и методиками (3–7).

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Некоторые штаммы L. monocytogenes, подвергавшиеся стрессовым воздействиям, особенно кислотному стрессу, могут образовывать очень слабый ореол или не образовывать ореол вообще.
2. Для дифференциации L. monocytogenes и L. ivanovii необходимо провести дополнительные биохимические тесты, поскольку оба вида демонстрируют непрозрачный ореол вследствие активности PIPLC.
3. Некоторые микроорганизмы, не относящиеся к Listeria spp., также могут образовывать на этой среде синие колонии, поэтому для дифференциации требуется биохимическая характеристика.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, свободно текущий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется гель светло-янтарного цвета с опалесценцией.

Реакция

Реакция 7,2%-ного водного раствора по массе при 25 °C.

pH

Диапазон pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Продуктивность

Культуральные характеристики определяют после добавления стерильных селективной добавки OA Selective Supplement FD212A и обогащающей добавки LP Enrichment Supplement 1 FD214 и инкубации при температуре 37 ± 1 °C в течение 48 ± 4 ч.

Степень восстановления принимают за 100 % роста бактерий на референсной среде — агаре с переваром соево-казеинового бульона (триптиказо-соевый агар). Характерную реакцию сравнивают с реакцией, полученной для ранее утверждённой серии.

Специфичность

Культуральные характеристики определяют после добавления стерильных селективной добавки OA Selective Supplement FD212A и обогащающей добавки LP Enrichment Supplement 1 FD214 и инкубации при температуре 37 ± 1 °C в течение 48 ± 4 ч. Характерную реакцию сравнивают с