Питательная микробиологическая среда HiMedia MV070-500G MR-VP HiVeg среда (глюкозо-фосфатная) производства HiMedia с конечным pH 6,9 ± 0,2. Среда предназначена для постановки тестов на метиловый красный и Фогеса—Проскауэра при дифференциации представителей группы коли-аэрогенес; температура хранения составляет 10–30 °C.

Назначение

Среда рекомендована для проведения тестов на метиловый красный (MR) и Фогеса—Проскауэра (VP) при дифференциации представителей группы коли-аэрогенес, выделенных из пищевых продуктов, молочных продуктов и воды.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Тесты на метиловый красный и Фогеса—Проскауэра относятся к биохимическим методам идентификации видов бактерий. Оба теста основаны на обнаружении определённых продуктов распада углеводов.

Все представители семейства Enterobacteriaceae по определению ферментируют глюкозу. В бульоне MR-VP после инкубации в течение 18–24 ч ферментация приводит к образованию кислых продуктов метаболизма. Поэтому первоначально все энтеробактерии при исследовании дают положительную реакцию с метиловым красным.

После дальнейшей инкубации, необходимой для проведения теста — от 2 до 5 суток, — микроорганизмы с положительной реакцией MR продолжают продуцировать кислоты. Это приводит к снижению pH до кислых значений, преодолению буферной способности фосфатной системы и сохранению кислой среды с pH 4,2 или ниже.

Микроорганизмы с отрицательной реакцией MR подвергают исходные продукты ферментации дальнейшему метаболизму посредством декарбоксилирования. В результате образуется нейтральный ацетилметилкарбинол (ацетоин), кислотность среды снижается, а pH повышается до нейтрального значения — pH 6,0 или выше.

В присутствии атмосферного кислорода и щёлочи нейтральные конечные продукты — ацетоин и 2,3-бутандиол — окисляются до диацетила. Диацетил реагирует с креатином с образованием красного окрашивания.

Среда MR-VP HiVeg® изготовлена с полной заменой пептонов животного происхождения на пептоны растительного происхождения для исключения рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (TSE).

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 17,0 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагревайте до полного растворения среды.
3. Разлейте приготовленную среду по пробиркам порциями по 10 мл.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении около 0,103 МПа и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Методика проведения тестов

Тест на метиловый красный

Тест на метиловый красный выполняют после 5 суток инкубации при 30 °C.

Тест Фогеса—Проскауэра

Культуры для теста VP инкубируют при 30 °C в течение 24–48 ч. Для выполнения теста применяют несколько процедур.

Метод Веркмана

1. Добавьте к 50 мл культуры 2 капли 2%-ного раствора хлорида железа.
2. Добавьте 5 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия.
3. Встряхните пробирку для тщательного перемешивания.
4. Устойчивая медная окраска, развивающаяся через несколько минут, указывает на положительную реакцию.

Метод О’Мира

1. Добавьте 25 мг твёрдого креатина к 5 мл культуры.
2. Добавьте 5 мл концентрированного 40%-ного раствора гидроксида натрия.
3. Тщательно встряхните пробирку.
4. Появление красной окраски через несколько минут указывает на положительную реакцию.

Модифицированный метод Левина, Эпстайна и Вона

Методика О’Мира модифицирована растворением креатина в концентрированном растворе гидроксида калия — реагенте О’Мира R031.

Метод Барритта

Вон, Митчелл и Левин рекомендовали метод Барритта:

1. К 5 мл культуры добавьте 1 мл реагента Барритта B — R030, 40%-ный гидроксид калия.
2. Добавьте 3 мл реагента Барритта A — R029, 5%-ный α-нафтол в абсолютном этаноле.
3. Положительная реакция проявляется появлением розовой эозиновой окраски в течение 2–5 мин.

Образцы

Тип образца: изолированные микроорганизмы из пищевых и молочных продуктов, а также проб воды.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных продуктов применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно установленным руководствам.

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно установленным руководствам и местным нормативным требованиям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: прозрачный раствор светло-жёлтого цвета без осадка.

Реакция среды

Реакция: реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 1,7 % при 25 °C.

pH: 6,9 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 30–32 °C в течение 18–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее микроорганизм обозначался как Enterobacter aerogenes.

Технические характеристики

Ограничения применения

1. Тесты MR и VP не следует использовать как единственный способ дифференциации E. coli от групп Klebsiella—Enterobacter.
2. Известный микроорганизм, положительный по ацетоину, иногда не даёт положительной реакции VP. Для устранения такой вероятности культуру, содержащую реагенты VP, следует осторожно нагреть.

Условия хранения и срок годности

• Сухую среду храните при температуре 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости.
• Приготовленную среду храните при температуре 2–8 °C.
• Используйте продукт до истечения срока годности, указанного на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом вентилируемом