HiMedia MV070-500G MR-VP HiVeg среда (глюкозо-фосфатная)

Сухая питательная среда HiMedia MV070-500G MR-VP HiVeg (глюкозо-фосфатная) для дифференциации бактерий группы coli-aerogenes. Применяется для проведения тестов на метиловый красный (MR) и Фогеса-Проскауэра (VP) при анализе проб воды, пищевых продуктов и молочной продукции.

Область применения

Среда рекомендуется для биохимической идентификации бактериальных видов, в частности для дифференциации представителей семейства Enterobacteriaceae (группа coli-aerogenes), выделенных из различных образцов.

Принцип измерения и интерпретация

В основе анализа лежит определение специфических продуктов распада углеводов в процессе метаболизма. Все представители Enterobacteriaceae являются ферментаторами глюкозы.

Тест на метиловый красный (MR)

После 18–24 часов инкубации ферментация приводит к образованию кислых метаболитов. При дальнейшей инкубации (от 2 до 5 суток) MR-положительные организмы продолжают вырабатывать кислоты, что приводит к снижению pH среды до 4,2 или ниже, преодолевая действие фосфатной буферной системы. MR-отрицательные организмы метаболизируют продукты первичной ферментации путем декарбоксилирования с образованием нейтрального ацетилметилкарбинола (ацетоина), что снижает кислотность и повышает pH до 6,0 и выше.

Тест Фогеса-Проскауэра (VP)

В присутствии атмосферного кислорода и щелочи нейтральные конечные продукты (ацетоин и 2,3-бутандиол) окисляются до диацетила, который при взаимодействии с креатином дает красное окрашивание.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Растворить 17,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагреть для полного растворения компонентов.
3. Разлить по пробиркам по 10 мл.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.

Процедура тестирования

• Тест MR: Инкубация при 30 °C в течение 5 суток.
• Тест VP: Инкубация при 30 °C в течение 24–48 часов.

Варианты проведения VP-теста

• Метод Веркмана: к 50 мл культуры добавить 2 капли 2 % раствора хлорида железа (III) и 5 мл 10 % раствора гидроксида натрия. Появление устойчивого медного цвета через несколько минут свидетельствует о положительной реакции.
• Метод О'Миры: к 5 мл культуры добавить 25 мг твердого креатина и 5 мл концентрированного (40 %) раствора гидроксида натрия. Появление красного цвета через несколько минут после встряхивания свидетельствует о положительной реакции.
• Модификация Левина, Эпштейна и Воуна: использование метода О'Миры с растворением креатина в концентрированном растворе гидроксида калия.
• Метод Барритта: к 5 мл культуры добавить 1 мл реагента Барритта B (40 % раствор гидроксида калия) и 3 мл реагента Барритта A (5 % раствор $\alpha$-нафтола в абсолютном этаноле). Положительный результат характеризуется появлением эозиново-розового цвета в течение 2–5 минут.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Общие параметры

• Вид: однородный свободнотекущий порошок от кремового до желтого цвета
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-желтый прозрачный раствор без осадка
• pH готового раствора (при 25 °C): 6,70–7,10
• Тип продукта: HiVeg™ (растительный пептон, без компонентов животного происхождения для исключения рисков BSE/TSE)
• Материал упаковки: ПНД (HDPE)
• Вес: 500 г

Контроль качества (Культуральные характеристики)

Характеристики наблюдаются после инкубации при 30–32 °C в течение 18–48 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон необходимо плотно закрыть для предотвращения комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания.

Ограничения и предостережения

1. Тесты MR и VP не должны быть единственным методом дифференциации E. coli от групп Klebsiella-Enterobacter.
2. В редких случаях известные ацетоин-положительные организмы не дают положительной VP-реакции. Для устранения этой проблемы рекомендуется осторожно нагреть культуру с добавленными VP-реагентами.
3. Работа с образцами должна проводиться в соответствии с правилами микробиологической безопасности. Загрязненные материалы подлежат стерилизации в автоклаве перед утилизацией.