HiMedia MV070-100G MR-VP HiVeg среда (глюкозо-фосфатная)

Глюкозо-фосфатная среда HiMedia MV070-100G MR-VP HiVeg для проведения тестов на метиловый красный (MR) и Фогеса-Проскауэра (VP). Применяется для дифференциации бактерий группы coli-aerogenes, выделенных из пищевых, молочных и водных проб; вес упаковки 100 г.

Область применения

Среда рекомендуется для биохимической идентификации видов бактерий, в частности для дифференциации представителей группы coli-aerogenes (семейство Enterobacteriaceae), выделенных из различных образцов, включая пищевые продукты, молочную продукцию и пробы воды.

Принцип измерения и интерпретация

Определение основано на детекции специфических продуктов распада углеводов в процессе метаболизма. Все представители Enterobacteriaceae являются ферментаторами глюкозы.

1. Тест на метиловый красный (MR): После 18–24 часов инкубации ферментация приводит к образованию кислых метаболитов. При дальнейшей инкубации (от 2 до 5 суток) MR-положительные организмы продолжают вырабатывать кислоты, что приводит к снижению pH до 4,2 или ниже, преодолевая действие фосфатной буферной системы. MR-отрицательные организмы метаболизируют продукты первичной ферментации путем декарбоксилирования с образованием нейтрального ацетилметилкарбинола (ацетоина), что снижает кислотность и поднимает pH до 6,0 и выше.
2. Тест Фогеса-Проскауэра (VP): В присутствии атмосферного кислорода и щелочи нейтральные конечные продукты (ацетоин и 2,3-бутандиол) окисляются до диацетила, который при взаимодействии с креатином дает красный цвет.

Среда MR-VP HiVeg® полностью изготовлена на основе растительных пептонов без использования компонентов животного происхождения для исключения рисков BSE/TSE (губчатой энцефалопатии).

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Растворить 17,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагреть до полного растворения компонентов.
3. Разлить по пробиркам по 10 мл.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.

Процедура тестирования

• Тест MR: Инкубация культур при 30 °C в течение 5 суток.
• Тест VP: Инкубация культур при 30 °C в течение 24–48 часов.

Варианты проведения VP-теста

• Метод Веркмана: К 50 мл культуры добавить 2 капли 2 % раствора хлорида железа (III) и 5 мл 10 % раствора гидроксида натрия. Перемешать. Положительная реакция — появление устойчивого медного окрашивания через несколько минут.
• Метод О'Миры: К 5 мл культуры добавить 25 мг твердого креатина, затем 5 мл концентрированного (40 %) раствора гидроксида натрия. Перемешать. Положительная реакция — появление красного цвета через несколько минут.
• Модификация Левина, Эпштейна и Воуна: Креатин растворяют в концентрированном растворе гидроксида калия.
• Метод Барритта: К 5 мл культуры добавить 1 мл реагента Барритта B (40 % раствор гидроксида калия) и 3 мл реагента Барритта A (5 % $\alpha$-нафтол в абсолютном этаноле). Положительная реакция — появление эозиново-розового цвета в течение 2–5 минут.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Дополнительные параметры

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободнотекучий порошок от кремового до желтого цвета.
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-желтый прозрачный раствор без осадка.
• Реакция: pH 1,7 % водного раствора при 25 °C составляет 6,9 $\pm$ 0,2.
• Диапазон pH: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 30–32 °C в течение 18–48 часов.

Ограничения и предостережения

1. Тесты MR и VP не должны использоваться как единственный метод дифференциации E. coli от групп Klebsiella-Enterobacter.
2. В редких случаях известный ацетоин-положительный организм может не дать положительной VP-реакции. Для устранения этой проблемы рекомендуется осторожно нагреть культуру, содержащую реагенты для VP-теста.
3. При работе с образцами следует соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности и использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом помещении. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать флакон для предотвращения комкования.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Утилизация: использованные или непригодные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.