Питательная среда HiMedia MV070-100G MR-VP HiVeg среда (глюкозо-фосфатная) на основе растительных пептонов с конечным pH 6,9 ± 0,2. Среда предназначена для постановки тестов на метиловый красный и Фогеса—Проскауэра при дифференциации представителей группы кишечной палочки и аэрогенов из пищевых, молочных и водных образцов.

Назначение

Среда рекомендована для проведения тестов на метиловый красный (MR) и Фогеса—Проскауэра (VP), применяемых при дифференциации представителей группы кишечной палочки и аэрогенов, выделенных из различных образцов.

Тип образца: изолированные микроорганизмы из пищевых и молочных продуктов, а также проб воды.

Среда изготовлена с полной заменой пептонов животного происхождения на растительные пептоны HiVeg для исключения рисков, связанных с BSE/TSE.

Состав

Состав, г/л:

Компонент	г/л
Буферизованный пептон HiVeg®	7,000
Декстроза (глюкоза)	5,000
Дикалийфосфат	5,000
Конечный pH при 25 °C	6,9 ± 0,2

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров работы среды.

Принцип проведения MR- и VP-тестов

Тесты на метиловый красный и Фогеса—Проскауэра относятся к биохимическим методам идентификации видов бактерий. Оба теста основаны на выявлении определённых продуктов распада углеводов.

Все представители семейства Enterobacteriaceae по определению ферментируют глюкозу. В бульоне MR-VP после инкубации в течение 18–24 ч ферментация приводит к образованию кислых продуктов метаболизма. Поэтому первоначально все энтеробактерии при исследовании дают положительную реакцию с метиловым красным.

При последующей инкубации, необходимой для проведения процедуры тестирования и занимающей от 2 до 5 суток, микроорганизмы с положительной реакцией MR продолжают образовывать кислоты. Это приводит к снижению pH, преодолению фосфатной буферной системы и сохранению кислой среды с pH 4,2 или ниже.

Микроорганизмы с отрицательной реакцией MR дополнительно метаболизируют первичные продукты ферментации путём декарбоксилирования с образованием нейтрального ацетилметилкарбинола (ацетоина). В результате кислотность среды снижается, а pH повышается до нейтрального значения — pH 6,0 или выше.

В присутствии атмосферного кислорода и щёлочи нейтральные конечные продукты — ацетоин и 2,3-бутандиол — окисляются до диацетила. Диацетил реагирует с креатином с образованием красного окрашивания.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 17,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагревайте суспензию до полного растворения среды.
3. Разлейте среду в пробирки по 10 мл.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм (ориентировочно 0,10 МПа) при 121 °C в течение 15 мин.

Методика проведения теста на метиловый красный

Тест MR выполняют после инкубации в течение 5 суток при 30 °C.

После завершения инкубации проводят реакцию с метиловым красным. Сохраняющаяся кислая реакция среды свидетельствует о продолжении образования кислот и соответствует положительной реакции MR; значение pH составляет 4,2 или ниже.

Методики проведения VP-теста

Культуры для VP-теста инкубируют при 30 °C в течение 24–48 ч. Для постановки VP-теста применяют несколько вариантов процедур.

Метод Веркмана

1. К 50 мл культуры добавьте 2 капли 2%-ного раствора хлорида железа(III).
2. Добавьте 5 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия.
3. Тщательно встряхните пробирку для перемешивания.
4. Устойчивая медная окраска, развивающаяся через несколько минут, означает положительную реакцию.

Метод О’Мира

1. К 5 мл культуры добавьте 25 мг твёрдого креатина.
2. Добавьте 5 мл концентрированного 40%-ного раствора гидроксида натрия.
3. Тщательно встряхните пробирку.
4. Появление красной окраски через несколько минут после встряхивания означает положительную реакцию.

Модифицированный метод Левина, Эпштейна и Во́гна

Методика О’Мира была модифицирована путём растворения креатина в концентрированном растворе гидроксида калия — реагенте О’Мира R031.

Метод Барритта

Во́гн, Митчелл и Левин рекомендовали метод Барритта:

1. К 5 мл культуры добавьте 1 мл реагента Барритта B — 40%-ного гидроксида калия, R030.
2. Добавьте 3 мл реагента Барритта A — 5%-ного α-нафтола в абсолютном этаноле, R029.
3. Перемешайте содержимое.
4. Положительная реакция определяется по появлению розовой эозиновой или красной окраски в течение 2–5 мин.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: прозрачный раствор светло-жёлтого цвета без осадка.

Реакция среды

Реакция: реакция 1,7%-ного водного раствора при 25 °C.

pH: 6,9 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики учитывают после инкубации при 30–32 °C в течение 18–48 ч.

Организм	Посевная доза (КОЕ)	Рост	Тест MR	Тест VP
Klebsiella pneumoniae ATCC 23357	50–100	обильный	отрицательная реакция	положительная реакция, розовая эозиновая или красная окраска в течение 2–5 мин
Escherichia coli ATCC 25922 (00013*)	50–100	обильный	положительная реакция, ярко-красная окраска	отрицательная реакция
#Klebsiella aerogenes ATCC 13048 (00175*)	50–100	обильный	отрицательная реакция	положительная реакция, розовая эозиновая или красная окраска в течение 2–5 мин

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее организм был известен как Enterobacter aerogenes.

Технические характеристики

Параметр	Значение
Происхождение	Без компонентов животного происхождения, растительная основа
Тип продукта	HiVeg™
Физическая форма	Порошок
Тип упаковки	Полиэтилен высокой плотности (HDPE)
Масса	100 г
Назначение изделия	Питательная среда
Температура хранения невскрытого продукта	10–30 °C
Температура хранения приготовленной среды	2–8 °C
Конечный pH при 25 °C	6,9 ± 0,2
Диапазон pH	6,70–7,10

Сбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам и местным нормативам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Условия хранения и срок годности

Храните продукт при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.

После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к комкованию продукта.

Храните в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывайте контейнер.

Приготовленную среду храните при 2–8 °C.

Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке. Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение установленного срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Меры предосторожности

Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.

При работе используйте:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.

При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.

Рекомендации по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения метода

1. Тесты MR и VP не следует использовать как единственный способ дифференциации E. coli от групп Klebsiella и Enterobacter.
2. Известный микроорганизм, положительный по ацетоину, иногда не даёт положительной реакции VP. Для устранения такой возможности следует осторожно нагреть культуру, содержащую реагенты VP.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов среды путём автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материал, контактировавший с образцом, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.