HiMedia MM162-500G Среда Лёвенштейна-Йенсена (L.J. среда)

Питательная микробиологическая среда HiMedia MM162-500G «Среда Лёвенштейна—Йенсена (L.J. среда)» представляет собой химически определённый порошок в упаковке из полиэтилена высокой плотности. Среда предназначена для выделения и культивирования видов Mycobacterium; для культивирования бычьих и других глицерофобных штаммов глицерин в состав не добавляют.

Назначение

Среда рекомендована в соответствии с Индийской фармакопеей (IP) для выделения и культивирования видов Mycobacterium.

Тип образца: изолят.

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 6,84 г части A в 600 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина.
2. При необходимости нагрейте смесь для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте нагреванием при 121 °C в течение 25 мин.
4. В асептических условиях суспендируйте 0,4 г части B в 20 мл стерильной очищенной или дистиллированной воды.
5. Для растворения красителя инкубируйте суспензию в течение 1–2 ч при 37 °C.
6. Перед использованием встряхните раствор части B.
7. В асептических условиях подготовьте 1000 мл эмульсии яйца.
8. Асептически добавьте к эмульсии яйца растворы частей A и B.
9. Разлейте по 5 мл в пробирки Маккартни объёмом 25 мл и плотно завинтите крышки.
10. Разместите пробирки горизонтально, коагулируйте и уплотните среду в инсписсаторе или сушильном шкафу при 85 °C в течение 60 мин.

После добавления эмульсии яичного желтка pH может сместиться в щелочную область, что способно привести к обесцвечиванию среды.

Принцип и интерпретация

Твёрдые среды для выделения и культивирования микобактерий подразделяются на яичные и агаровые. Яичные среды содержат цельные яйца или яичный желток, картофельную муку, соли и глицерин; затвердевание среды происходит за счёт уплотнения при нагревании.

Среда Лёвенштейна—Йенсена относится к наиболее распространённым яичным средам. Первоначальная формула Лёвенштейна содержала красители конго красный и малахитовый зелёный. В модификации Йенсена изменены содержания цитрата и фосфата, исключён конго красный и увеличена концентрация малахитового зелёного. В последующих модификациях Груфта в состав добавляли два антимикробных компонента для повышения селективности.

Среда поддерживает рост широкого спектра микобактерий и может применяться для проведения теста на ниацин. Среда рекомендована Индийской фармакопеей (IP).

Малахитовый зелёный подавляет рост большинства контаминирующих микроорганизмов, сохраняющихся после деконтаминации образца. Малахитовый зелёный выполняет функции ингибитора и индикатора pH:

• образование синей зоны указывает на снижение pH под действием грамположительных контаминантов, например стрептококков;
• жёлтые зоны свидетельствуют о разрушении красителя грамотрицательными бациллами;
• протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное разрушение среды.

Глицерин не следует добавлять в среду при культивировании бычьих или других глицерофобных штаммов.

Для идентификации сапрофитов рекомендуется инокулировать и инкубировать каждый образец в трёх экземплярах:

• для идентификации сапрофитов — при комнатной температуре 25 °C;
• для определения наличия или отсутствия пигментации фотоchromогенных и скотохромогенных микобактерий — при 35 °C, попеременно на свету и в темноте, в зависимости от типа микроорганизма.

В стандартной практике культивирование проводят аэробно при 35 °C.

Для стандартных процедур деконтаминации и выделения следует руководствоваться соответствующими лабораторными методиками.

Культуральные характеристики

Характеристики определяют в присутствии 5–10 % CO₂ с добавленной основой из эмульсии яйца после инкубации при 35–37 °C в течение 4–5 недель.

Внешний вид и контроль качества

Внешний вид части A

Часть A: однородный сыпучий порошок от белого до почти белого цвета.

Внешний вид части B

Часть B: однородные сыпучие кристаллы зеленовато-синего цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

После уплотнения смесь стерильной базовой среды и эмульсии цельного яйца коагулирует с образованием непрозрачных гладких скошенных поверхностей бледного голубовато-зелёного цвета.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Назначение изделия: среда
• Масса: 500 г
• Температура хранения продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C

Ограничения применения

• Среда является средой общего назначения и может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.
• На среде могут расти некоторые грамположительные контаминанты, например стрептококки, а также грамотрицательные бациллы.
• На среде могут расти некоторые сапрофиты.
• Протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное разрушение среды.

Обращение с образцами и безопасность

После использования контаминированные материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку. При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица. При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики. При работе с образцами необходимо соблюдать стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами. Информацию по безопасности следует уточнять в соответствующих паспортах безопасности.

Хранение и срок годности

Храните продукт в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C, а приготовленную среду — при 2–8 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на маркировке.

После вскрытия контейнер необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к комкованию. Храните контейнер в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывайте контейнер. Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в пределах указанного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания. При утилизации инфекционных материалов, а также материалов, контактировавших с образцом, соблюдайте утверждённые лабораторные процедуры; деконтаминацию и утилизацию выполняйте в соответствии с действующими лабораторными методиками.