HiMedia MM162-500G Среда Лёвенштейна-Йенсена (L.J. среда)

Сухая питательная среда Лёвенштейна-Йенсена (L.J. среда) HiMedia MM162-500G для изоляции и культивирования видов Mycobacterium. Рекомендуется к применению в соответствии с Индийской фармакопеей (IP); вес упаковки составляет 500 г.

Принцип измерения и интерпретация

Среда Лёвенштейна-Йенсена представляет собой плотную среду на основе яиц (содержит цельные яйца или яичный желток, картофельную муку, соли и глицерин), которая затвердевает путем инсписсации (сгущения при нагревании).

В состав входит краситель малахитовый зеленый, который выполняет две функции:

1. Ингибитор: предотвращает рост большинства контаминантов, выживших после деконтаминации образца.
2. Индикатор pH: образование синей зоны указывает на снижение pH из-за роста грамположительных контаминантов (например, стрептококков), а желтые зоны свидетельствуют о разрушении красителя грамотрицательными бациллами.

Среда поддерживает рост широкого спектра микобактерий и может быть использована для проведения ниацинового теста. При культивировании глицерофобических штаммов (например, бычьих) глицерин в среду не добавляют.

Методика приготовления и использования

Приготовление компонентов

1. Часть А: Растворите 6,84 г порошка Части А в 600 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина. При необходимости нагрейте до полного растворения. Стерилизуйте при температуре 121 °C в течение 25 минут.
2. Часть Б: В условиях асептики растворите 0,4 г порошка Части Б в 20 мл стерильной очищенной или дистиллированной воды. Инкубируйте раствор при 37 °C в течение 1–2 часов до полного растворения красителя. Перед использованием перемешайте.
3. Эмульсия: Асептически приготовьте 1000 мл эмульсии цельного яйца.

Сборка и стерилизация среды

1. Асептически добавьте раствор Части А и раствор Части Б в яичную эмульсию.
2. Распределите по 5 мл смеси в бутыли Маккартни объемом 25 мл, плотно закрутив крышки.
3. Разместите бутыли горизонтально.
4. Проведите коагуляцию и инсписсацию среды в инсписсаторе или в духовке с горячим воздухом при температуре 85 °C в течение 60 минут.

Примечание: После добавления яичной эмульсии pH может сместиться в щелочную сторону, что может привести к обесцвечиванию среды.

Посев и инкубация

Рекомендуется инокулировать каждый образец в трех повторах:

• Для идентификации сапрофитов при комнатной температуре (25 °C).
• Для определения наличия пигментации фотохромогенами и скотохромогенами при 35 °C (поочередно на свету и в темноте в зависимости от типа организма).
• Рутинное культивирование проводится в аэробных условиях при 35 °C.

Технические характеристики

Состав (на 600 мл)

Общие параметры

• Температура хранения: 10–30 °C (готовая среда: 2–8 °C)
• Вес нетто: 500 г

Культуральные характеристики

Наблюдаются в присутствии 5–10 % CO₂, с добавлением яичной эмульсии, после инкубации при 35–37 °C в течение 4–5 недель.

Контроль качества

• Внешний вид Части А: белый или почти белый гомогенный свободнотекущий порошок.
• Внешний вид Части Б: зеленовато-синие гомогенные свободнотекущие кристаллы.
• Цвет и прозрачность готовой среды: после инсписсации смесь стерильной базовой среды и эмульсии цельного яйца коагулирует, образуя опаковые гладкие скосы бледно-сине-зеленого цвета.

Ограничения и предостережения

• Среда общего назначения; может не поддерживать рост привередливых (fastidious) организмов.
• Возможен рост некоторых грамположительных контаминантов (например, стрептококков) и грамотрицательных бацилл.
• Некоторые сапрофиты также могут расти на данной среде.
• Протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное переваривание среды.
• После использования загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве перед утилизацией.