HiMedia MM162-100G Среда Лёвенштейна-Йенсена (L.J. среда)

Питательная микробиологическая среда HiMedia MM162-100G Среда Лёвенштейна-Йенсена (L.J. среда) с химически определённым составом и порошкообразной формой. Среда предназначена для выделения и культивирования видов Mycobacterium в соответствии с требованиями Индийской фармакопеи (IP), включая инкубацию при 35–37 °C в течение 4–5 недель.

Назначение

Среда рекомендована для выделения и культивирования видов Mycobacterium в соответствии с Индийской фармакопеей (IP).

• Тип образца: изолят
• Назначение изделия: питательная среда
• Масса: 100 г
• Происхождение: химически определённая среда HiCynth™
• Форма выпуска: порошок
• Тип упаковки: HDPE

Состав

Количество компонентов указано на 600 мл.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Методика приготовления

1. Приготовьте суспензию 6,84 г части A в 600 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина.
2. При необходимости нагревайте суспензию до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте часть A нагреванием при 121 °C в течение 25 мин.
4. В асептических условиях приготовьте суспензию 0,4 г части B в 20 мл стерильной очищенной или дистиллированной воды.
5. Для растворения красителя выдерживайте суспензию в течение 1–2 ч при 37 °C.
6. Перед использованием встряхните раствор части B.
7. Одновременно асептически приготовьте 1000 мл эмульсии яиц.
8. Асептически добавьте к яичной эмульсии растворы частей A и B.
9. Распределите по 5 мл полученной смеси во флаконы Маккартни вместимостью 25 мл и плотно завинтите крышки.
10. Разместите флаконы горизонтально, коагулируйте и уплотните среду в инсписсаторе или сушильном шкафу с горячим воздухом при 85 °C в течение 60 мин.

После добавления эмульсии яичного желтка pH может смещаться в щелочную область, что может привести к обесцвечиванию среды.

Принцип действия и интерпретация

Твёрдые среды для выделения и культивирования микобактерий подразделяются на яичные и агаровые. Яичные среды содержат цельные яйца или яичный желток, картофельную муку, соли и глицерин; отверждение таких сред выполняют уплотнением при нагревании.

Среда Лёвенштейна—Йенсена относится к наиболее распространённым яичным средам. Первоначальная формула Лёвенштейна содержала красители конго красный и малахитовый зелёный. Йенсен модифицировал среду Лёвенштейна, изменив содержание цитрата и фосфата, исключив конго красный и увеличив концентрацию малахитового зелёного. В последующие модификации Груфта были добавлены два противомикробных компонента для повышения селективности.

Среда поддерживает рост широкого спектра микобактерий и может применяться для проведения теста на ниацин. Малахитовый зелёный подавляет рост большинства контаминантов, сохраняющихся после деконтаминации образца. Не добавляйте глицерин в среду при культивировании бычьих или других глицерофобных штаммов.

Малахитовый зелёный выполняет функции ингибитора и индикатора pH:

• образование синей зоны указывает на снижение pH под действием грамположительных контаминантов, например стрептококков;
• появление жёлтых зон связано с разрушением красителя грамотрицательными бациллами;
• протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное переваривание среды.

Для каждого образца рекомендовано выполнять инокуляцию и инкубацию в трёх повторностях:

a. Для идентификации сапрофитов — при комнатной температуре 25 °C.

b. Для определения наличия или отсутствия пигментации у фотоchromогенов и скотохромогенов — попеременно при 35 °C на свету и в темноте в зависимости от типа организма.

В стандартной практике культивирование проводят аэробно при 35 °C.

Для стандартных процедур деконтаминации и выделения следует использовать соответствующие методики.

Культуральные характеристики

Характеристики определяют в присутствии 5–10 % CO₂, с добавлением основы из яичной эмульсии, после инкубации при 35–37 °C в течение 4–5 недель.

Контроль качества

Внешний вид части A

Часть A: однородный сыпучий порошок от белого до почти белого цвета.

Внешний вид части B

Часть B: однородные сыпучие кристаллы зеленовато-синего цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Смесь стерильной базовой среды и эмульсии цельного яйца после уплотнения при нагревании коагулирует с образованием непрозрачных гладких скосов бледного голубовато-зелёного цвета.

Тип образца и обращение с ним

Тип образца: изолят.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Ограничения применения

• Среда является средой общего назначения и может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.
• На среде могут расти некоторые грамположительные контаминанты, например стрептококки, а также грамотрицательные бациллы.
• На среде могут расти некоторые сапрофиты.
• Протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное переваривание среды.

Условия хранения и срок годности

• Хранение сухого продукта: при 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение приготовленной среды: при 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия: хранить продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков вследствие гигроскопичности порошка.
• Образование комков может быть вызвано несоблюдением условий хранения.
• Место хранения: сухое, вентилируемое, защищённое от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования контейнер необходимо плотно закрывать.
• Рабочие характеристики среды должны сохраняться при применении в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при рекомендованной температуре хранения.

Требования безопасности

Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку. При работе с образцами и культурами используйте:

• защитные перчатки;
• защитную