HiMedia MM162-100G Среда Лёвенштейна-Йенсена (L.J. среда)

Сухая питательная среда HiMedia MM162-100G Лёвенштейна-Йенсена (L.J. среда) для изоляции и культивирования видов Mycobacterium. Состав разработан в соответствии с Индийской фармакопеей (IP) и предназначен для выделения микобактерий из различных типов биоматериала.

Принцип измерения и интерпретация

Среда Лёвенштейна-Йенсена относится к группе яичных сред, которые затвердевают путем инсписсации (уплотнения при нагревании). В состав входят цельные яйца или яичный желток, картофельная мука, соли и глицерин.

Малахитовый зеленый в составе среды выполняет две функции:

1. Ингибитор: подавляет рост большинства контаминантов, выживших после деконтаминации образца.
2. Индикатор pH: образование синей зоны указывает на снижение pH из-за роста грамположительных контаминантов (например, стрептококков), а желтые зоны свидетельствуют о разрушении красителя грамотрицательными бациллами.

Протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное переваривание среды. Для идентификации сапрофитов образцы инкубируют при комнатной температуре (25 °C), а для определения пигментации фотохромогенных и скотохромогенных видов — при 35 °C в условиях чередования света и темноты. Стандартное культивирование проводится аэробно при 35 °C.

Состав

Состав компонентов на 600 мл среды:

Методика приготовления и анализа

Подготовка среды

1. Приготовление части А: Растворите 6,84 г части А в 600 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина. При необходимости нагрейте для полного растворения. Стерилизуйте при 121 °C в течение 25 минут.
2. Приготовление части Б: В условиях асептики растворите 0,4 г части Б в 20 мл стерильной очищенной или дистиллированной воды. Для полного растворения красителя инкубируйте раствор 1–2 часа при 37 °C. Перед использованием перемешайте.
3. Смешивание: Асептически приготовьте 1000 мл эмульсии яичного желтка. Добавьте в эмульсию растворы части А и части Б.
4. Розлив и инсписсация: Распределите по 5 мл смеси в бутыли Маккарти объемом 25 мл, плотно закрутите крышки. Положите бутыли горизонтально. Проведите коагуляцию и инсписсацию в инсписсаторе или в духовке с горячим воздухом при 85 °C в течение 60 минут.

Примечание: После добавления яичной эмульсии pH может сместиться в щелочную сторону, что может привести к обесцвечиванию среды.

Особенности работы с образцами

• Тип образца: Изолят.
• Ограничение: Не добавляйте глицерин в среду, если планируется культивирование бычьих или других глицерофобных штаммов.
• Утилизация: Загрязненные материалы после использования должны быть стерилизованы в автоклаве перед утилизацией.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются в присутствии 5–10 % CO₂, с добавлением яичной эмульсии, после инкубации при 35–37 °C в течение 4–5 недель.

Технические характеристики

• Вес: 100 г
• Внешний вид части А: белый или почти белый гомогенный свободно текущий порошок
• Внешний вид части Б: зеленовато-синие гомогенные свободно текущие кристаллы
• Цвет и прозрачность готовой среды: после инсписсации смесь стерильной базовой среды и яичной эмульсии коагулирует в бледно-сине-зеленые, опаковые гладкие скосы

Область применения и ограничения

Среда используется для выделения и культивирования широкого спектра микобактерий, а также может применяться для проведения ниацинового теста.

Ограничения:

• Является средой общего назначения и может не поддерживать рост привередливых (fastidious) организмов.
• Возможен рост некоторых грамположительных контаминантов (например, стрептококков) и грамотрицательных бацилл.
• Возможен рост некоторых сапрофитов.
• Протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное переваривание среды.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 2–8 °C.
• Особенности: Продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.