HiMedia MM1276-500G Разбавленная среда Соттона

Разбавленная среда Соттона HiMedia MM1276-500G для культивирования и подсчёта микобактерий в соответствии с Индийской фармакопеей (IP). Применяется для определения количества колониеобразующих единиц (КОЕ) в вакцинах известной активности; вес упаковки составляет 500 г.

Принцип измерения

Разбавленная среда Соттона используется для определения числа колониеобразующих единиц (КОЕ) в вакцинах с известной активностью согласно IP. Цитрат аммония-железа и сульфат магния обеспечивают поступление неорганических ионов и источников азота, необходимых для роста микобактерий. L-аспарагин добавлен для стимуляции инициации роста и увеличения его скорости, а глицерол служит источником углерода.

Область применения

Среда предназначена для анализа фармацевтических образцов (вакцин). Для идентификации микроорганизмов после посева на данную среду необходимо проведение дополнительных биохимических и серологических тестов.

Методика проведения анализа

Подготовка образца и посев

1. Содержимое лиофилизированной вакцины для людей восстанавливают разбавителем, указанным на флаконе.
2. Содержимое 5 таких контейнеров объединяют.
3. Готовят три разведения объединённой вакцины, используя разбавленную среду Соттона, чтобы получить оптимальное количество колоний (100, 40 и 20) при посеве 0,2 мл.
4. Посевают по 0,2 мл каждого разведения на поверхность скошенной части среды Левенштейна-Йорданса (L.J. Medium, |MM162|).
5. Инкубируют при температуре 35–37 °C в течение 4–5 недель.

Интерпретация результатов

Вакцина проходит тест, если в 0,1 мл восстановленной вакцины содержится от $1 \times 10^5$ до $33 \times 10^5$ колониеобразующих единиц.

Приготовление среды

Среда состоит из двух частей (A и B), которые стерилизуют раздельно и смешивают после автоклавирования.

Приготовление части А

1. Суспендируют 2,52 г сухой среды (эквивалентный вес на литр) в 500 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 20 мл глицерина.
2. При необходимости нагревают для полного растворения.
3. Стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx 0,1$ МПа / 15 lbs) в течение 20 минут.

Приготовление части B

1. Суспендируют 0,667 г компонента части B в 500 мл дистиллированной воды.
2. Стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °C в течение 20 минут.

Смешивание

После автоклавирования растворы частей А и B асептически смешивают. Охлаждают до 45–50 °C, тщательно перемешивают и разливают в стерильные пробирки или колбы.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Дополнительные параметры

Контроль качества

• Внешний вид части А: однородный свободнотекущий порошок от кремового до почти белого цвета.
• Внешний вид части B: однородный свободнотекущий порошок от белого до почти белого цвета.
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-жёлтый, прозрачный или слегка опалесцирующий раствор.
• Диапазон pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Результаты наблюдались при использовании разбавленной среды Соттона в качестве разбавителя с последующим посевом на среду L.J. после инкубации при 35–37 °C в течение 4–5 недель.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение сухой среды: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 15–25 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать для предотвращения комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания.

Меры предосторожности и утилизация

• При работе с образцами и культурами соблюдать стандартные правила микробиологической лабораторной практики.
• Использовать средства индивидуальной защиты: перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Утилизация: использованные или непригодные препараты, а также материалы, контактировавшие с образцами, подлежат обязательной стерилизации в автоклаве или сжиганию в соответствии с лабораторными протоколами по обращению с инфекционными материалами.