HiMedia MM036-100G B## Аналитическая среда

Аналитическая среда HiMedia MM036-100G B## для микробиологического определения содержания витамина B₁₂. Применяется для количественного анализа с использованием тест-организма Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 в соответствии с требованиями Индийской фармакопеи (IP).

Область применения

Среда предназначена для микробиологического анализа витамина B₁₂. Она содержит все необходимые питательные вещества и витамины, за исключением самого витамина B₁₂, что позволяет использовать рост Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 в качестве индикатора концентрации исследуемого вещества.

Принцип измерения

Метод основан на зависимости роста микроорганизма от концентрации лимитирующего фактора (витамина B₁₂). Среда обеспечивает рост Lactobacillus leichmannii ATCC 7830, который измеряется турбидиметрически (по мутности) или ацидиметрически. Для определения концентрации в исследуемом образце строится стандартная кривая зависимости абсорбции (оптической плотности) от известной концентрации стандарта витамина B₁₂.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Суспендируйте 7,94 г порошка в 100 мл дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте для полного растворения компонентов.
3. Тщательно перемешайте для равномерного распределения небольшого количества осадка.
4. Распределите по 5 мл среды в каждую пробирку для анализа (содержащую возрастающие количества стандарта или исследуемого вещества).
5. Доведите общий объем в каждой пробирке до 10 мл дистиллированной водой.
6. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа) в течение 5 минут.
7. Сразу после стерилизации охладите среду.

Подготовка инокулята

Инокулят готовят путем пересева из стоковой культуры, созданной методом укольного посева. Рекомендуется использовать свежепересеянные организмы, инкубированные при 37 °C в течение 24 часов, которые затем центрифугируют, промывают и суспендируют в 10 мл физиологического раствора.

Процедура анализа

1. Внесите инокулят в пробирки с подготовленной средой.
2. Инкубируйте при температуре 35–37 °C в течение 18–24 часов.
3. Измерьте рост (абсорбцию) при длине волны 620 нм.
4. Рассчитайте концентрацию витамина B₁₂ в пробе на основании построенной стандартной кривой.

Важное примечание: Для предотвращения ошибочных результатов используйте только чистую стеклянную посуду, очищенную от остатков моющих средств. Любое загрязнение посторонними материалами может привести к искажению данных.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Дополнительные параметры

Контроль качества

• Внешний вид: однородный порошок от кремового до желтого цвета, может образовывать мягкие комки, легко разрушаемые до состояния порошка.
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-янтарный прозрачный раствор, может содержать небольшой осадок.
• Реакция: pH 7,9% водного раствора при 25 °C составляет 5,50–6,00.
• Рост: фиксируется постепенное увеличение роста (повышение абсорбции при 620 нм) при увеличении уровней стандарта цианокобаламина от 0,0 до 0,2 нг на пробирку (10 мл).

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: при температуре +2…+8 °C в плотно закрытом контейнере (предпочтительно в эксикаторе).
• Требования: использовать свежеприготовленную среду до истечения срока годности, указанного на этикетке.