HiMedia MM036-100G B## Аналитическая среда

Аналитическая питательная среда HiMedia MM036-100G B для микробиологического определения витамина B12 содержит все необходимые питательные компоненты, кроме витамина B12, при pH 5,50–6,00. Применяется с тест-организмом Lactobacillus leichmannii ATCC 7830; готовую среду хранят при температуре ниже 8 °C в плотно закрытой ёмкости.

Назначение

Среда B12 Assay Medium предназначена для микробиологического анализа витамина B12 с использованием Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 в соответствии с Индийской фармакопеей (IP).

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип анализа

Виды Lactobacillus плохо растут на неселективных питательных средах и требуют специальных питательных компонентов. Среды для анализа витаминов применяются при микробиологическом определении содержания витаминов.

Для микробиологического анализа витаминов используют три типа сред:

• поддерживающие среды — для хранения исходной культуры;
• среды для посевного материала — для подготовки инокулята;
• аналитические среды — для количественного определения исследуемого витамина.

Среда Vitamin B12 Assay Medium не содержит витамина B12, но включает остальные витамины и питательные вещества, необходимые для роста Lactobacillus leichmannii ATCC 7830. Среда впервые описана Capp и соавторами и рекомендована для применения по методикам USP, AOAC и IP с использованием Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 в качестве тест-организма.

Стандартную кривую строят по известным разведениям стандартов витамина B12. Инокулят для анализа готовят пересевом из исходной культуры, предварительно полученной методом укола. Рекомендуется использовать свежепересеянные микроорганизмы, инкубированные при 37 °C в течение 24 ч, после чего культуру центрифугируют, промывают и суспендируют в 10 мл физиологического раствора.

Полученный рост измеряют турбидиметрически или ацидиметрически. Стандартную кривую строят как зависимость оптической плотности от концентрации витамина B12. Концентрацию витамина B12 в исследуемой пробе рассчитывают по стандартной кривой.

Тест-организм для инокуляции необходимо культивировать и поддерживать на средах, рекомендованных для этой цели.

Методика приготовления и проведения анализа

1. Взвесьте 7,94 г сухой среды и суспендируйте в 100 мл дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте среду для равномерного распределения небольшого осадка.
4. Для анализа внесите по 5 мл среды в каждую аналитическую пробирку, содержащую возрастающие количества стандарта или исследуемого образца.
5. Доведите общий объём в каждой пробирке до 10 мл добавлением дистиллированной воды.
6. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов силы на кв. дюйм (≈0,103 МПа; ≈1,03 бар) и температуре 121 °C в течение 5 мин.
7. Немедленно охладите среду.
8. Для построения стандартной кривой используйте стандарт витамина B12 (цианокобаламина) в количествах 0; 0,025; 0,05; 0,075; 0,1; 0,125; 0,15 и 0,2 нг на аналитическую пробирку объёмом 10 мл.
9. После инокуляции и инкубации оцените рост турбидиметрически или ацидиметрически.
10. Рассчитайте концентрацию витамина B12 в исследуемом образце по стандартной кривой.

Технические характеристики

• Наименование: B12 Assay Medium
• Артикул: MM036
• Масса: 100 г
• Назначение: аналитическая питательная среда для микробиологического определения витамина B12
• Тест-организм: Lactobacillus leichmannii ATCC 7830
• Форма выпуска: порошок
• Происхождение: животное
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: стеклянный флакон
• Реакция 7,9% водного раствора при 25 °C: pH 5,50–6,00
• Конечный pH среды при 25 °C: 5,50–6,00
• Объём приготовления по инструкции: 100 мл из 7,94 г среды
• Объём среды на одну аналитическую пробирку: 5 мл
• Конечный объём в аналитической пробирке: 10 мл
• Температура стерилизации: 121 °C
• Время стерилизации: 5 мин
• Условия инкубации для культуральной характеристики: 35–37 °C в течение 18–24 ч
• Длина волны для регистрации оптической плотности: 620 нм
• Рабочие уровни цианокобаламина: 0; 0,025; 0,050; 0,075; 0,1; 0,125; 0,150 и 0,2 нг на аналитическую пробирку

Контроль качества

Внешний вид

Однородный порошок от кремового до жёлтого цвета, склонный к образованию мягких комков, которые легко разрушаются до порошкообразного состояния.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Прозрачный раствор светло-янтарного цвета, который может содержать небольшое количество осадка.

Реакция и pH

• Реакция: водный раствор с массовой концентрацией 7,9 % при 25 °C.
• pH: 5,50–6,00.

Рост

При увеличении содержания стандартного цианокобаламина в аналитической пробирке от 0,0 до 0,2 нг должен постепенно увеличиваться рост, что регистрируется как эквивалентное увеличение оптической плотности при 620 нм. Контрольные уровни цианокобаламина: 0,0; 0,025; 0,050; 0,075; 0,1; 0,125; 0,150 и 0,2 нг на аналитическую пробирку.

Культуральная характеристика

Микроб