5X Laemmli буфер HiMedia ML121-5ML (5 мл)

Буфер для подготовки белковых проб 5X Laemmli буфер HiMedia ML121-5ML (5 мл) производства HiMedia — концентрат 5X для электрофореза в полиакриламидном геле. Реагент применяют при подготовке проб для SDS-PAGE и иммуноблоттинга; перед нанесением на гель пробу смешивают с буфером и нагревают.

Идентификация продукта

Назначение и принцип действия

5X Laemmli буфер используют для подготовки белковых проб перед нанесением на гель при электрофорезе SDS-PAGE с трис-глициновым буфером для электрофореза, содержащим SDS. Буфер добавляют к каждой белковой пробе в соотношении 1:4, после чего пробу кипятят в течение 1–5 мин.

Буфер предназначен для внесения белковых проб в гель при SDS-PAGE и иммуноблоттинге. Бромфеноловый синий (BPB) служит индикаторным красителем: он помогает визуально контролировать внесение пробы в лунку и отслеживать фронт миграции, движущийся впереди белков. Глицерин увеличивает плотность пробы, благодаря чему она оседает на дно лунки; это уменьшает расплывание или потерю пробы в буфере и облегчает её внесение.

Додецилсульфат натрия (SDS) связывается с белками, придавая им суммарный отрицательный заряд. Это обеспечивает разделение белков преимущественно по размеру, а не по заряду. SDS также денатурирует белки и их субъединицы, способствуя разделению по размеру независимо от формы.

Состав

Буфер содержит бромфеноловый синий (BPB), додецилсульфат натрия (SDS), глицерин и Tris-HCl. Компоненты молекулярно-биологической степени чистоты предварительно смешаны. Продукт поставляется в виде готового раствора.

Подготовка рабочего раствора

Перед использованием 5X Laemmli буфер разводят с добавлением дитиотреитола (DTT, MB070) или β-меркаптоэтанола (MB041) в зависимости от выбранного способа подготовки пробы.

Разведение с 1 M DTT

Для получения 1X Laemmli буфера смешайте 2 части 5X Laemmli буфера, 7 частей белковой пробы и 1 часть 1 M DTT.

После разведения буфер следует заморозить. Перед использованием его необходимо подогреть, чтобы SDS перешёл в раствор. Рекомендуется хранить раствор аликвотами, чтобы снизить риск загрязнения при многократном использовании.

Разведение с β-меркаптоэтанолом

Для получения 1X Laemmli буфера добавьте β-меркаптоэтанол до конечной концентрации 5 % (об./об.):

Условия хранения и стабильность

Неразведённый 5X Laemmli буфер хранят при комнатной температуре. После разведения раствор хранят при −20 °C. При соблюдении рекомендованных условий хранения реагент стабилен в течение 12 месяцев.

Технические характеристики

Меры предосторожности

• Только для лабораторного применения; не предназначен для медицинского, фармацевтического, бытового или иного нелабораторного использования.
• Перед началом работы внимательно изучите паспорт безопасности реагента.
• При работе используйте защитные перчатки, одежду, средства защиты глаз и лица; соблюдайте лабораторные меры безопасности.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте надлежащие практики клинической лаборатории и стандартные меры предосторожности согласно установленным рекомендациям.
• Реагент несовместим с дезинфицирующими средствами, содержащими отбеливатель.
• Сведения об опасности и безопасном обращении приведены в паспорте безопасности продукта.

Контроль качества

Ожидаемые характеристики раствора обеспечиваются при хранении в рекомендованных условиях и использовании в пределах срока годности.