5X Laemmli буфер HiMedia ML121-10ML (10 мл)

Буферный раствор 5X Laemmli буфер HiMedia ML121-10ML (10 мл) производства HiMedia — готовый 5-кратный концентрат для подготовки проб белков. Реагент применяют при электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-PAGE) и вестерн-блоттинге; перед нанесением на гель пробы смешивают с буфером и нагревают.

Назначение и принцип действия

Буфер используют для подготовки и нанесения белковых проб при SDS-PAGE и вестерн-блоттинге. Его смешивают с пробой, нагревают и наносят на гель; для подготовки проб перед SDS-PAGE указано соотношение буфера и пробы 1:4 и нагревание в течение 1–5 мин. Применение буфера при электрофорезе с трис-глицин-SDS-электродным буфером предназначено для получения чёткого разделения полос.

В состав входят бромфеноловый синий, додецилсульфат натрия (SDS), глицерин и трис-HCl. Бромфеноловый синий служит индикаторным красителем: помогает визуально контролировать внесение пробы в лунки геля и отслеживать фронт красителя, движущийся впереди белков. Глицерин повышает плотность пробы, благодаря чему она опускается на дно лунки; это уменьшает расплывание или потерю пробы в буфере и облегчает её послойное внесение. SDS денатурирует белки и их субъединицы и придаёт белкам одинаковый суммарный отрицательный заряд, поэтому разделение происходит преимущественно по размеру, а не по заряду или форме.

Приготовление рабочего раствора

Перед применением концентрат разбавляют 1 М дитиотреитолом (DTT) или β-меркаптоэтанолом — в зависимости от выбранного пользователем варианта.

Разведение с 1 М DTT

Для получения 1X буфера смешайте 2 части 5X буфера, 7 частей белковой пробы и 1 часть 1 М DTT. После разбавления буфер следует заморозить; перед использованием его необходимо прогреть, чтобы SDS перешёл в раствор. Для снижения риска загрязнения при многократном обращении рекомендуется хранить раствор отдельными аликвотами.

Разведение с β-меркаптоэтанолом

Для получения 1X буфера добавьте β-меркаптоэтанол до конечной концентрации 5 % (об./об.). Пример приготовления:

Состав

Раствор содержит бромфеноловый синий, додецилсульфат натрия (SDS), глицерин и трис-HCl. Компоненты молекулярно-биологической степени чистоты предварительно смешаны. Реагент поставляется в виде готового раствора.

Технические характеристики

Идентификация продукта

Хранение и срок годности

Храните концентрат при комнатной температуре. После разбавления храните буфер при −20 °C; перед использованием прогрейте его для растворения SDS. При соблюдении рекомендованных условий хранения реагент стабилен в течение 12 месяцев.

Безопасность и ограничения

Реагент предназначен только для лабораторного применения; не использовать в медицинских, бытовых и иных целях. Перед началом работы ознакомьтесь с паспортом безопасности. При обращении используйте защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз и лица; соблюдайте правила лабораторной безопасности. При работе с клиническими образцами следуйте надлежащим практикам клинической лаборатории и установленным мерам предосторожности. Не совместим с дезинфицирующими средствами, содержащими отбеливатель. Информацию об опасностях и безопасном обращении см. в паспорте безопасности реагента.

Контроль рабочих характеристик

Заявленные рабочие характеристики раствора ожидаются при хранении в рекомендованных температурных условиях и использовании в пределах срока годности.