HiMedia MCD813-500G Буферная HiCynth среда с дрожжевым экстрактом и активированным углем

Питательная микробиологическая среда HiMedia MCD813-500G Буферная HiCynth среда с дрожжевым экстрактом и активированным углем — сухая среда массой 500 г для селективного выделения и культивирования видов Legionella. Среда применяется для анализа проб воды, включая воду из градирен, с использованием селективных добавок MWY и Legi Growth.

Назначение

Среда рекомендована для селективного выделения и культивирования видов Legionella из проб воды, отобранных в градирнях и других объектах.

Тип образца: вода.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик. HiCynth™ Peptone No.5 представляет собой химически определённый пептон.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 20 г среды в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Добавьте 2,4 г гранул KOH и перемешайте до растворения.
3. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. В асептических условиях добавьте стерильное регидратированное содержимое по одному флакону MWY Selective Supplement (FD040) и Legi Growth Supplement без SS, комплект Twin Pack (FD041A).
7. Тщательно перемешайте и разлейте среду при постоянном перемешивании в стерильные чашки Петри. Следите за равномерным распределением частиц активированного угля.
8. Для повышения селективности в расплавленную среду по выбору можно добавить селективные добавки VCAT Selective Supplement (FD017), C3V Selective Supplement (FD037) или PGV Selective Supplement (FD038).

Принцип действия и интерпретация

Первоначально агар с угольно-дрожжевым экстрактом CYE был разработан как модификация среды F-G. В состав среды F-G входили крахмал и ферментативный гидролизат казеина. В модифицированной среде эти компоненты заменили соответственно активированным углём и дрожжевым экстрактом, что обеспечило более эффективное выделение Legionella pneumophila.

Последующее добавление буфера ACES улучшило рабочие характеристики угольно-дрожжевой среды. Дополнительная модификация с введением α-кетоглутарата повысила чувствительность среды. Buffered Charcoal Yeast Extract Agar Base основана на этой модификации. Buffered Charcoal Yeast Extract HiCynth™ Agar Base отличается заменой пептонов животного и растительного происхождения на химически определённые пептоны, что позволяет избежать рисков, связанных с BSE/TSE для пептонов животного происхождения.

Виды Legionella представляют собой не образующие спор узкие грамотрицательные палочки. Legionella вызывает пневмонию, включая болезнь легионеров, а также лихорадочное заболевание, известное как лихорадка Понтиак. В обычных питательных средах эти микроорганизмы не окисляют и не ферментируют углеводы и не растут на кровяном агаре с кровью барана. На буферизованном угольно-дрожжевом агаре рост происходит значительно лучше и быстрее.

Аминокислоты являются основным источником энергии для Legionella. L-цистин необходим для роста и играет важную роль в метаболизме микроорганизмов. L-цистин и пирофосфат железа поддерживают рост Legionella. Активированный уголь действует как детоксицирующий компонент. Пептон HiCynth™ Peptone No.5 служит источником витаминов, азота и углерода. Буфер ACES поддерживает оптимальный для роста pH. Гидрохлорид L-цистина, пирофосфат железа и α-кетоглутарат стимулируют рост видов Legionella.

Для селективного выделения можно использовать антибиотические добавки, подавляющие сопутствующую микрофлору:

• C3V Selective Supplement (FD037) содержит цефалотин, колистин, ванкомицин и циклогексимид.
• MWY Selective Supplement (FD040) содержит глицин, полимиксин B, анисомицин, ванкомицин, бромтимоловый синий и бромкрезоловый пурпурный.

Техническое отличие от стандартных угольно-дрожжевых сред заключается в применении химически определённых пептонов HiCynth™ вместо пептонов животного и растительного происхождения.

Требования к работе с образцами

Для проб воды необходимо применять подходящие методы отбора и обработки образцов в соответствии с действующими руководствами и местными нормативами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

При работе с культурами Legionella необходимо использовать халат, маску и перчатки. Работы следует проводить в защитном боксе.

Меры безопасности

Среда предназначена только для профессионального применения. Перед открытием контейнера необходимо ознакомиться с маркировкой.

При работе с образцами и культурами следует использовать:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

Необходимо соблюдать надлежащие правила работы в микробиологической лаборатории и стандартные меры предосторожности при обращении с клиническими образцами. Руководствоваться требованиями безопасности, указанными в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

• Для полной идентификации необходимо провести дополнительные биохимические подтверждающие тесты.
• Разные микроорганизмы имеют индивидуальные требования к условиям роста и могут демонстрировать вариабельные характеристики роста на среде.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от серого до чёрного цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,7%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется опалесцирующий гель серо-чёрного цвета.

Реакция

Условия определения: реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 4,0 % при 25 °C.

pH: 6,9 ± 0,2.

Диапазон pH

Диапазон pH: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в атмосфере с относительной влажностью 90 % с добавлением добавок FD041A и FD040 после инкубации при 35–37 °C в течение 3–4 суток.

* Соответствующие номера WDCM.

Оценка рабочих характеристик

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованных условиях.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения сухой среды: плотно закрытый контейнер.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования контейнер необходимо герметично закрывать.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо безопасно утилизировать автоклавированием и/или сжиганием.

При утилизации инфекционных материалов следует соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими лаборат