HiMedia MCD395-500G OF базальная HiCynth среда

Базальная среда HiMedia MCD395-500G OF HiCynth для определения окислительного и ферментативного метаболизма углеводов грамотрицательными бактериями. Применяется в таксономических исследованиях семейства Enterobacteriaceae; содержит химически определенный пептон HiCynth™ для исключения рисков BSE/TSE.

Принцип измерения

Среда разработана по методу Хью и Лейфсона для дифференциации метаболизма углеводов у грамотрицательных бактерий. В качестве индикатора pH используется бромтимоловый синий, который меняет цвет на жёлтый при образовании кислоты в результате расщепления углеводов.

Определение проводится путем инокуляции бактерий в две параллельные пробы с одним и тем же углеводом: одна проба остается открытой (аэробные условия), вторая покрывается стерильным минеральным маслом для исключения доступа кислорода (анаэробные условия).

• Ферментативные организмы: вызывают кислую реакцию (пожелтение) в обеих пробах.
• Окислительные организмы: вызывают кислую реакцию только в открытой пробе; в закрытой пробе наблюдается слабый рост без изменения цвета.
• Неокислительные/неферментативные организмы: не меняют цвет в закрытой пробе и дают щелочную реакцию в открытой.

Подвижность микроорганизмов определяется по диффузной зоне, расходящейся от линии инокуляции; неподвижные организмы растут строго вдоль линии посева.

Состав

Состав, г/л:

Методика приготовления и проведения анализа

Приготовление среды

1. Растворить 9,38 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Разлить по 100 мл и стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.

Добавление углеводов

Углеводы добавляются в стерильную базальную среду асептически в виде 10 % растворов:

• Для получения среды с декстрозой: добавить 10 мл стерильного 10 % раствора декстрозы на 100 мл базальной среды.
• Для получения среды с лактозой: добавить 10 мл стерильного 10 % раствора лактозы на 100 мл базальной среды.
• Для получения среды с сахарозой: добавить 10 мл стерильного 10 % раствора сахарозы на 100 мл базальной среды.

После смешивания среду разливают асептически по 5 мл в стерильные пробирки (в дубликатах для аэробного и анаэробного тестов).

Процедура анализа

1. Произвести инокуляцию методом укола (stabbing).
2. Одну пробирку из каждой пары покрыть 2 мл стерильного минерального масла, вторую оставить открытой.
3. Инкубировать при температуре 35–37 °C в течение 18–48 часов или дольше.
4. Результаты считывают через 48 часов.

Технические характеристики

• Вес: 500 г
• Физическая форма: порошок
• Цвет готовой среды: зеленый, прозрачный или слегка опалесцирующий гель
• Консистенция: полутвердая (сопоставима с 0,2 % агаровым гелем)
• Диапазон pH: 6,60–7,00
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)
• Происхождение компонентов: химически определенные (HiCynth™)

Область применения и ограничения

Среда используется для работы с изолированными микроорганизмами.

Ограничения:

• Результаты зависят от pH, поэтому необходимо контролировать данный параметр.
• Для роста некоторых требовательных организмов может потребоваться дополнение среды 2 % сывороткой или 0,1 % дрожжевым экстрактом.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать для предотвращения комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

При работе со средой и культурами необходимо использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, защитная одежда, очки/экран для лица) и соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности.

Контаминированные материалы и использованные среды подлежат обязательной стерилизации в автоклаве или сжиганию перед утилизацией в соответствии с установленными лабораторными протоколами.