Питательная микробиологическая среда HiMedia MCD395-500G OF базальная HiCynth среда представляет собой порошок с температурой хранения 10–30 °C. Используется для определения окислительного и ферментативного метаболизма углеводов у грамотрицательных бактерий; конечный pH среды составляет 6,8 ± 0,2 при 25 °C.

Назначение

OF (окислительно-ферментативная) базальная среда применяется для определения окислительного и ферментативного метаболизма углеводов у грамотрицательных бактерий. Тип образца: выделенный микроорганизм.

Метод используют в таксономических исследованиях бактерий семейства Enterobacteriaceae. Для сравнения окислительного и ферментативного метаболизма используют две пробирки с одной и той же углеводной средой: одну пробирку покрывают минеральным маслом для исключения кислорода, вторую оставляют открытой.

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

* Пептон с химически определённым составом.

Принцип измерения и интерпретация

Среда OF разработана Hugh и Leifson для изучения окислительного и ферментативного метаболизма углеводов у грамотрицательных бактерий. Этот критерий применяется в таксономических исследованиях Enterobacteriaceae.

В базальной среде OF Basal HiCynth™ животные и растительные пептоны заменены пептонами с химически определённым составом, чтобы исключить риски BSE/TSE, связанные с использованием животных пептонов. Пептон HiCynth™ № 4 обеспечивает среду необходимыми для роста бактерий источниками углерода и азота, витаминами и другими компонентами. Фосфат выполняет буферную функцию, а низкая концентрация агара определяет подвижность бактерий и распространение образующейся кислоты по поверхности среды. Бромтимоловый синий служит индикатором pH. Исследуемый углевод добавляют отдельно.

Подвижность определяют по диффузной зоне, расходящейся от линии посева. Неподвижные микроорганизмы растут вдоль линии посева.

Декстроза (глюкоза) является основным углеводом для использования в базальной среде OF Basal HiCynth™. Однако некоторые микроорганизмы могут метаболизировать другие углеводы, даже если они не способны утилизировать декстрозу.

Разложение углевода с образованием кислоты определяется по изменению цвета индикатора pH — бромтимолового синего — на жёлтый. Окислительная утилизация происходит при контакте среды с воздухом, а ферментативная утилизация — в условиях исключения воздуха.

По методике Hugh и Leifson, если грамотрицательный микроорганизм засевают в две пробирки с этой средой, содержащей углевод, одну пробирку покрывают минеральным маслом для исключения кислорода, а вторую оставляют открытой. Это позволяет наблюдать реакции, имеющие дифференциальное значение:

• ферментативные микроорганизмы вызывают кислую реакцию как в закрытой, так и в открытой среде;
• окислительные микроорганизмы вызывают кислую реакцию в открытой среде, а в закрытой среде дают слабый рост без изменения среды;
• микроорганизмы, которые нельзя классифицировать как окислительные или ферментативные, не изменяют закрытую среду и вызывают щелочную реакцию в открытой среде.

Среду готовят с 1 % декстрозы и без 1 % декстрозы. Для каждого микроорганизма используют по две пробирки с каждой углеводной средой; посев выполняют уколом. Одну засеянную пробирку с каждой углеводной средой покрывают 2 мл стерильного минерального масла, вторую пробирку оставляют открытой.

Пробирки инкубируют при 35–37 °C в течение 18–48 ч или дольше. Результаты считывают через 48 ч. Кислая реакция окислительных микроорганизмов лучше заметна на поверхности среды, после чего постепенно распространяется по всей среде. При слабой или медленной окислительной реакции первоначальная щелочная реакция на поверхности открытой пробирки может сохраняться несколько дней и в дальнейшем переходить в кислую реакцию.

Для повышения питательности и стимуляции роста бактерий среду OF Basal HiCynth™ можно дополнить 2 % сыворотки или 0,1 % дрожжевого экстракта.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 9,38 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду порциями по 100 мл.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует приблизительно 0,10 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. В первые 100 мл стерильной базальной среды асептически добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора декстрозы.
7. Во вторые 100 мл добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора лактозы.
8. В третьи 100 мл добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора сахарозы.
9. Перемешайте среды и асептически разлейте по 5 мл в стерильные пробирки в двух повторностях для аэробной и анаэробной ферментации.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до зеленовато-жёлтого цвета.

Гелеобразование

Полужидкая среда, сопоставимая с 0,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель зелёного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 0,94 % масс./об. при 25 °C: pH 6,8 ± 0,2.

Диапазон pH

6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее обозначался как Enterobacter aerogenes.

^ Ранее обозначался как Pseudomonas aeruginosa.

Пробоподготовка и обращение с образцами

После использования