HiMedia MCD395-100G OF базальная HiCynth среда

Базальная среда HiCynth OF (окисление-ферментация) HiMedia MCD395-100G для определения типа метаболизма углеводов у грамотрицательных бактерий. Применяется в таксономических исследованиях семейства Enterobacteriaceae; содержит химически определенный пептон HiCynth™ для исключения рисков BSE/TSE.

Принцип измерения

Среда разработана по методу Хью и Лейфсона для дифференциации бактерий по способности окислять или ферментировать углеводы. В качестве индикатора используется бромтимоловый синий: при расщеплении углевода с образованием кислоты цвет среды меняется с зеленого на желтый. Низкая концентрация агара позволяет оценивать подвижность микроорганизмов и дисперсию вырабатываемой кислоты.

Различие между окислением и ферментацией определяется по наличию доступа кислорода:

• Ферментативный метаболизм: кислая реакция (пожелтение) наблюдается как в открытой пробирке, так и в пробирке, перекрытой стерильным минеральным маслом.
• Окислительный метаболизм: кислая реакция наблюдается только в открытой пробирке; в перекрытой пробирке наблюдается слабый рост без изменения цвета.
• Отсутствие метаболизма: в перекрытой пробирке нет изменений, в открытой — щелочная реакция.

Состав

Состав, г/л:

Методика приготовления и проведения анализа

Приготовление среды

1. Растворить 9,38 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Разлить по 100 мл в емкости и стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.

Внесение углеводов

В стерильную базальную среду асептически добавляют стерильные 10 % растворы углеводов (по 10 мл на каждые 100 мл среды):

• Для определения метаболизма декстрозы (глюкозы): добавить 10 мл 10 % раствора декстрозы.
• Для определения метаболизма лактозы: добавить 10 мл 10 % раствора лактозы.
• Для определения метаболизма сахарозы: добавить 10 мл 10 % раствора сахарозы.

Процедура анализа

1. Смешать среду с углеводом и асептически разлить по 5 мл в стерильные пробирки (в двух экземплярах для каждого углевода).
2. Произвести инокуляцию методом «посева-прокола» (stabbing).
3. Одну из двух пробирок перекрыть 2 мл стерильного минерального масла для исключения доступа кислорода, вторую оставить открытой.
4. Инкубировать при 35–37 °C в течение 18–48 часов или дольше.
5. Оценить результат через 48 часов. При слабой окислительной реакции начальное защелачивание поверхности в открытой пробирке может сохраняться несколько дней перед переходом в кислую реакцию.

Технические характеристики

• Вес: 100 г
• Физическая форма: порошок
• Цвет prepared-среды: зеленый, прозрачный или слегка опалесцирующий гель
• pH (0,94 % водный раствор при 25 °C): 6,60–7,00
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)
• Происхождение компонентов: химически определенные (HiCynth™)

Область применения и ограничения

Среда используется для анализа изолированных микроорганизмов. Ограничения:

• Результат зависит от pH, поэтому необходимо контролировать данный параметр.
• Для роста некоторых требовательных организмов может потребоваться дополнение среды 2 % сывороткой или 0,1 % экстрактом дрожжей.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Утилизация и безопасность

Загрязненные материалы и использованные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией в соответствии с лабораторными протоколами работы с инфекционными материалами. При работе использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица.