Питательная среда HiMedia MCD395-100G OF базальная HiCynth среда — химически определённая порошковая среда массой 100 г. Среда предназначена для определения окислительного и ферментативного метаболизма углеводов грамотрицательными бактериями; результаты зависят от pH и условий доступа кислорода.

Назначение

OF-базальная среда применяется для определения окислительного и ферментативного метаболизма углеводов грамотрицательными бактериями. Тип образца: выделенный микроорганизм.

Методика используется при таксономических исследованиях семейства Enterobacteriaceae. Для изучения реакции к среде отдельно добавляют исследуемый углевод; сравнивают аэробные условия и условия, исключающие доступ кислорода.

Состав

* Химически определённый пептон.
** Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с рабочими параметрами.

Принцип действия и интерпретация результатов

Среда OF была разработана Hugh и Leifson для изучения окислительного и ферментативного метаболизма углеводов грамотрицательными бактериями.

Пептон HiCynth™ № 4 обеспечивает микроорганизмы необходимыми источниками углерода и азота, витаминами и другими компонентами, необходимыми для бактериального роста. Животные и растительные пептоны заменены химически определёнными пептонами, что позволяет исключить риски, связанные с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (TSE), характерные для пептонов животного происхождения.

Фосфат выполняет функцию буфера. Низкая концентрация агара определяет подвижность микроорганизмов и распространение кислоты, образующейся на поверхности среды. Бромтимоловый синий используется как индикатор pH. Разрушение углевода с образованием кислоты сопровождается изменением цвета индикатора на жёлтый.

Окислительное использование углевода происходит при контакте среды с воздухом, а ферментативное — при исключении доступа воздуха. Для дифференциальной оценки реакции микроорганизм засевают в две пробирки с одинаковым углеводом: одну пробирку покрывают стерильным минеральным маслом для исключения кислорода, вторую оставляют открытой.

• Ферментативные микроорганизмы вызывают кислую реакцию как в закрытой, так и в открытой пробирке.
• Окислительные микроорганизмы вызывают кислую реакцию в открытой пробирке и дают слабый рост без изменения среды в закрытой пробирке.
• Микроорганизмы, которые нельзя классифицировать как окислительные или ферментативные, не изменяют среду в закрытой пробирке и вызывают щелочную реакцию в открытой пробирке.

Подвижность определяют по диффузной зоне, распространяющейся от линии посева. Неподвижные микроорганизмы растут вдоль линии посева.

Декстроза (глюкоза) является наиболее важным углеводом для использования с OF-базальной средой HiCynth™. Некоторые микроорганизмы могут метаболизировать другие углеводы, даже если не способны использовать декстрозу.

Методика приготовления и проведения анализа

1. Приготовьте среду с 1 % декстрозы и без 1 % декстрозы.
2. Суспендируйте 9,38 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
3. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
4. Разлейте среду порциями по 100 мл.
5. Простерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
6. Охладите стерильную базальную среду до 45–50 °C.
7. В первые 100 мл стерильной базальной среды асептически добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора декстрозы.
8. Во вторые 100 мл добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора лактозы.
9. В третьи 100 мл добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора сахарозы.
10. Перемешайте среды и асептически разлейте по 5 мл в стерильные пробирки. Для каждого углевода подготовьте пробирки в двух повторностях: для аэробной и анаэробной ферментации.
11. Для каждого микроорганизма используйте по две пробирки с каждой углеводной средой.
12. Засейте среды уколом по линии посева.
13. Одну засеянную пробирку с каждой углеводной средой покройте 2 мл стерильного минерального масла; вторую пробирку оставьте открытой.
14. Инкубируйте пробирки при 35–37 °C в течение 18–48 ч или дольше.
15. Оцените результаты через 48 ч.

Кислая реакция у окислительных микроорганизмов более выражена на поверхности среды и постепенно распространяется по всему объёму. При слабой или медленной окислительной реакции первоначальная щелочная реакция на поверхности открытой пробирки может сохраняться несколько дней и позднее переходить в кислую.

Дополнительные компоненты

Для повышения питательности среды и улучшения роста бактерий OF-базальную среду HiCynth™ можно дополнить:

• сывороткой в концентрации 2 %;
• дрожжевым экстрактом в концентрации 0,1 %.

Некоторые требовательные микроорганизмы могут не расти без такой добавки.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, свободно сыпучий порошок кремового или зеленовато-жёлтого цвета.

Гелеобразование

Полутвёрдый гель, сопоставимый с 0,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель зелёного цвета.

Реакция среды

Реакция водного раствора концентрацией 0,94 % по массе к объёму при 25 °C: pH 6,8 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее назывался Enterobacter aerogenes.

^ Ранее назы