HiMedia MCD1496I-500G Тетратионатная среда Мюллера-Кауффмана с новобиоцином

Питательная среда HiMedia MCD1496I-500G Тетратионатная среда Мюллера-Кауфмана с новобиоцином — сухая порошкообразная среда с химически определённым пептоном HiCynth™ для селективного обогащения и выделения Salmonella. Среда предназначена для анализа пищевых продуктов, при этом не подходит для выращивания Salmonella Typhi, Salmonella Sendai и Salmonella Pullorum.

Назначение

Среда рекомендована для улучшенного обогащения и выделения Salmonella из пищевых образцов.

Тип образца: пищевые продукты
Назначение изделия: питательная среда
Масса: 500 г

Состав

Состав на 1 л:

* Пептон с химически определённым составом.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 89,42 г сухой среды, что соответствует массе обезвоженной среды на 1 л, в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте среду только до кипения.
3. Не автоклавируйте среду.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Непосредственно перед использованием в асептических условиях добавьте 20 мл раствора йода и восстановленное содержимое одного флакона добавки MKTT с новобиоцином (FD203).
6. Раствор йода приготовьте из 20 г йода и 25 г йодида калия в 100 мл стерильной дистиллированной воды.
7. Тщательно перемешайте среду для равномерного распределения карбоната кальция.
8. Разлейте среду в стерильные пробирки.

Из-за присутствия карбоната кальция приготовленная среда образует опалесцирующий раствор с белым осадком.

Принцип действия и интерпретация

Исследование пищевых продуктов на наличие Salmonella требует методик, отличающихся от применяемых в клинических лабораториях. Это связано с обычно низким содержанием Salmonella в пищевых продуктах и часто неудовлетворительным физиологическим состоянием патогенов после воздействия стрессовых факторов при переработке или хранении продуктов.

Повреждённые клетки Salmonella восстанавливаются в неселективной жидкой питательной среде, что облегчает обнаружение сублетально повреждённых микроорганизмов. Среда для предварительного обогащения должна обеспечивать восстановление клеточных повреждений, разбавление токсичных или ингибирующих веществ и достаточную питательность для роста Salmonella.

При анализе пищевых продуктов на Salmonella культуры предварительного обогащения обычно инкубируют при 35–37 °C в течение 18–24 ч, после чего часть культуры пересевают в одну или несколько селективных жидких сред обогащения. Обычно 1 мл культуры предварительного обогащения вносят в 9 мл селективной среды обогащения.

Селективные среды обогащения содержат компоненты, обеспечивающие размножение Salmonella и подавляющие рост конкурирующих микроорганизмов, не относящихся к Salmonella. Для предварительного обогащения Salmonella из пищевых продуктов метод BAM рекомендует лактозный бульон. Селективное обогащение проводят в тетратионатном бульоне и среде Раппапорта—Вассилиадиса. Для обнаружения пищевых Salmonella широко применяют различные модификации тетратионатного бульона.

Тетратионатный бульон рекомендован Мюллером как селективная среда для выделения Salmonella. Кауфман модифицировал формулу, включив в неё бычью желчь и бриллиантовый зелёный в качестве селективных агентов для подавления, в частности, бактерий рода Proteus. Спецификация британского стандарта определяет бриллиантовый зелёный тетратионатный бульон для выделения Salmonella из мяса и мясных продуктов, а также из птицы и продуктов из птицы. Среда также рекомендована для селективного выделения Salmonella из фекалий животных и загрязнённой сточными водами воды.

Селективность обеспечивается тетратионатом, образующимся в результате реакции тиосульфата и йода. Использование более одной селективной жидкой среды повышает вероятность выделения Salmonella из образцов, содержащих несколько серотипов.

В среде Мюллера—Кауфмана с тетратионатом и новобиоцином на основе HiCynth™ животные и растительные пептоны заменены химически определёнными пептонами. Это позволяет исключить риски BSE/TSE, связанные с пептонами животного происхождения. Пептон HiCynth™ № 1 является источником углерода, азота, витаминов и минеральных веществ. Синтетическое моющее средство № I и бриллиантовый зелёный действуют как селективные агенты, подавляющие грамположительные и другие грамотрицательные микроорганизмы. Карбонат кальция выполняет функцию буфера. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие. Тиосульфат натрия служит источником серы. Анионы тетратионата S₄O₆²⁻ являются основным селективным фактором в этих средах обогащения.

Помимо Salmonella, в среде могут расти другие организмы, включая Morganella morganii и некоторые представители семейства Enterobacteriaceae. Для всех выделенных предположительно положительных колоний Salmonella необходимо проводить подтверждающие тесты.

Пробоподготовка и обработка образцов

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и подготовки проб согласно действующим методическим рекомендациям.

При необходимости для подавления Proteus в бульон можно добавить 4 мг новобиоцина на 1 л среды.

1. Добавьте приблизительно 10 г образца в 100 мл бульона.
2. Тщательно встряхните.
3. Поместите колбу на 15 мин в водяную баню с температурой 45 °C.
4. Извлеките колбу и перенесите её в инкубатор или водяную баню с температурой 43 °C.
5. После инкубации в течение 18–24 ч и 48 ч выполните пересев на бриллиантовый зелёный агар HiCynth™, модифицированный (MCD016).

Несколько исследований показали повышение выделения Salmonella после инкубации селективной среды обогащения при 43 °C.

Среда не подходит для выращивания Salmonella Typhi, Salmonella Sendai, Salmonella Pullorum и других указанных видов.

Ограничения применения

1. Полная среда нестабильна и должна использоваться непосредственно после приготовления. Приготовленную среду допускается хранить при 2–8 °C в защищённом от света месте не более 7 суток.
2. Для всех выделенных предположительно положительных колоний Salmonella необходимо проводить подтверждающие тесты.

Технические характеристики

Температура хранения сухой среды: 10–30 °C
Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
Конечный pH при 25 °C: 8,2 ± 0,2
Диапазон pH: 8,00–8,40
Концентрация водного раствора для определения реакции: 8,93 % масс./об.
Масса упаковки: 500 г

Контроль качества

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до зеленовато-жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: образуется светло-зелёный опалесцирующий раствор с обильным белым осадком.

Реакция: реакция 8,93%-ного водного раствора при 25 °C; pH 8,2 ± 0,2.

pH: 8,00–8,40.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдали после инкубации при 43 °C в течение 18–48 ч с добавлением 20 мл раствора йода и добавки MKTT с новобиоцином (FD203), при последующем пересев