HiPurA® BL21(DE3) Competent клетки HiMedia MBT143-40R (40 реакц.)

Химически компетентные бактериальные клетки HiPurA® BL21(DE3) Competent клетки HiMedia MBT143-40R (40 реакц.) предназначены для трансформации плазмидной ДНК и получены из штамма E. coli BL21(DE3), не содержащего протеазы Lon и мембранной протеазы OmpT. Клетки применяются для субклонирования рекомбинантных плазмид и экспрессии белков под контролем T7-промотора; для максимальной эффективности трансформации ДНК должна быть свободна от фенола, этанола, белков и детергентов.

Назначение и особенности

Химически компетентные клетки готовы к использованию; изменённая клеточная мембрана обеспечивает лёгкое проникновение чужеродной ДНК. Препарат рекомендован для рутинного субклонирования рекомбинантных плазмид.

Штамм BL21(DE3) является производным штамма E. coli B и не содержит протеаз Lon и OmpT, которые могут разрушать экспрессируемые белки. Поэтому этот штамм используют для экспрессии рекомбинантных белков.

Принцип экспрессии

В штамме BL21(DE3) присутствует лизоген λDE3 с геном T7 РНК-полимеразы под контролем промотора lacUV5. Эта система расположена в геноме фага, обозначаемом DE3.

Клетки подходят для экспрессии с использованием T7- и T7-lac-промоторов, а также промоторов, распознаваемых РНК-полимеразой E. coli: lac, tac, trc, ParaBAD, PrhaBAD и T5. Для оптимальной экспрессии T7 РНК-полимеразы требуется IPTG; это необходимо для экспрессии рекомбинантных генов, клонированных ниже по ходу T7-промотора.

Требования к ДНК

Для максимальной эффективности трансформации экспериментальная ДНК должна быть свободна от фенола, этанола, белков и детергентов.

Комплектность

В комплект входит запас плазмидной ДНК pUC19, используемый в качестве контроля для определения эффективности трансформации.

Методика приготовления клеток

Клетки приготовлены по модифицированному протоколу Hanahan (1983, Journal of Molecular Biology, 166:557).