HiPurA® BL21(DE3) Competent клетки HiMedia MBT143-20R (20 реакц.)

Химически компетентные клетки HiPurA® BL21(DE3) Competent клетки HiMedia MBT143-20R (20 реакц.) — готовые к применению бактериальные клетки с изменённой мембраной, облегчающей проникновение чужеродной ДНК. Препарат предназначен для субклонирования рекомбинантных плазмид и экспрессии рекомбинантных белков; для максимальной эффективности трансформации ДНК должна быть свободна от фенола, этанола, белков и детергентов.

Назначение и принцип действия

Клетки химически компетентны: изменение клеточной мембраны облегчает проникновение чужеродной ДНК. Подготовка выполнена по модифицированному протоколу Hanahan (1983); клетки рекомендованы для рутинного субклонирования рекомбинантных плазмид.

Характеристики штамма и экспрессия белков

• Escherichia coli BL21(DE3) — производный штамм Escherichia coli B.
• В штамме отсутствуют протеаза Lon и мембранная протеаза OmpT, которые могут разрушать экспрессируемые белки; поэтому BL21(DE3) применяют для экспрессии рекомбинантных белков.
• BL21(DE3) содержит лизоген λDE3 с геном РНК-полимеразы T7 под контролем промотора lacUV5. Геном фага с этой конструкцией обозначается DE3.
• Штамм подходит для экспрессии под контролем промоторов T7 и T7 lac, а также промоторов, распознаваемых РНК-полимеразой Escherichia coli: lac, tac, trc, ParaBAD, PrhaBAD и T5.
• Для оптимальной экспрессии РНК-полимеразы T7 требуется ИПТГ, если рекомбинантные гены клонированы под контролем промотора T7.

Требования к ДНК для трансформации

Для достижения максимальной эффективности трансформации экспериментальная ДНК должна быть свободна от фенола, этанола, белков и детергентов.

Контроль эффективности трансформации

В комплект включён запас плазмидной ДНК pUC19 для определения эффективности трансформации.