HiPurA® BL21(DE3) Competent клетки HiMedia MBT143-10R (10 реакц.)

Компетентные клетки для клонирования HiPurA® BL21(DE3) Competent клетки HiMedia MBT143-10R (10 реакц.) — химически подготовленные клетки штамма E. coli BL21(DE3). Препарат применяют для субклонирования рекомбинантных плазмид и экспрессии белков; для оптимальной экспрессии T7 РНК-полимеразы требуется IPTG.

Назначение

Клетки предназначены для регулярного субклонирования рекомбинантных плазмид и экспрессии рекомбинантных белков. Готовые к использованию компетентные клетки имеют изменённую клеточную мембрану, через которую чужеродная ДНК может проникать в клетку.

Свойства штамма и экспрессионные системы

Штамм E. coli BL21(DE3) — производный от E. coli B. В нём отсутствуют протеаза Lon и мембранная протеаза OmpT, способные разрушать экспрессируемые белки, поэтому штамм используют для получения рекомбинантных белков.

BL21(DE3) содержит лизоген λDE3 с геном T7 РНК-полимеразы под контролем промотора lacUV5. Штамм подходит для экспрессии генов под контролем промоторов T7 и T7 lac, а также промоторов, распознаваемых РНК-полимеразой E. coli: lac, tac, trc, ParaBAD, PrhaBAD и T5. Для оптимальной экспрессии T7 РНК-полимеразы при экспрессии рекомбинантных генов, клонированных ниже по течению от промотора T7, требуется IPTG.

Подготовка клеток

Компетентные клетки приготовлены по модифицированному протоколу Hanahan (1983; «Журнал молекулярной биологии», том 166, с. 557).

Контроль эффективности трансформации

В комплект входит препарат плазмидной ДНК pUC19 для определения эффективности трансформации.

Для достижения максимальной эффективности трансформации экспериментальная ДНК не должна содержать фенол, этанол, белки и детергенты.