HiScript Two Step RT-PCR набор HiMedia MBT138-10R (10 реакц.)

Набор для двухэтапной ОТ-ПЦР HiScript Two Step RT-PCR набор HiMedia MBT138-10R (10 реакц.) предназначен для синтеза кДНК из матричной мРНК в пробирке с последующей амплификацией методом ПЦР. Набор применяют для получения одноцепочечной кДНК перед ПЦР; в состав входят случайные гексамеры, олиго(dT), их смесь и ингибитор рибонуклеазы.

Принцип работы

На этапе обратной транскрипции фермент с активностью обратной транскриптазы синтезирует кДНК (комплементарную ДНК) на матрице мРНК. В наборе используется обратная транскриптаза вируса лейкоза мышей Молони (M-MuLV RTase) — РНК-зависимая ДНК-полимераза. Полученная кДНК одноцепочечная; процесс её синтеза называют обратной транскрипцией или синтезом первой цепи кДНК.

Обратная транскрипция необходима перед ПЦР, поскольку ДНК-полимераза использует в качестве матрицы ДНК, а не РНК. После синтеза кДНК проводят её амплификацию методом ПЦР; последовательное выполнение этих этапов составляет двухэтапную ОТ-ПЦР.

Компоненты и свойства набора

Для синтеза кДНК предусмотрены случайные гексамеры, олиго(dT) и смесь случайных гексамеров с олиго(dT), а также ингибитор рибонуклеазы. Фермент и буфер, адаптированный для набора, предназначены для обеспечения эффективности и точности реакции обратной транскрипции. Эффективность амплификации, специфичность и стабильность реакции связаны с повышением чувствительности метода.