Реагент для выделения РНК RNA-XPress Reagent HiMedia MB601-100ML (100 мл)

Реагент для выделения РНК RNA-XPress Reagent HiMedia MB601-100ML (100 мл) — однофазный раствор тиоцианата гуанидина и фенола. Предназначен для быстрого выделения общей РНК из различных биологических образцов с последующим разделением РНК, ДНК и белков по фазам после добавления хлороформа и центрифугирования.

Назначение

RNA-XPress Reagent предназначен для выделения общей РНК из различных биологических источников, включая свежие ткани и клетки. Метод экстракции фенолом и хлороформом сохраняет целостность транскриптов, что позволяет использовать выделенную РНК для точного количественного определения экспрессии генов и Нозерн-блоттинга.

Принцип выделения РНК

RNA-XPress Reagent представляет собой однофазный раствор — смесь тиоцианата гуанидина и фенола, предназначенную для растворения РНК.

После добавления хлороформа и центрифугирования смесь разделяется на три фазы:

• водная фаза содержит РНК;
• межфазный слой содержит ДНК;
• органическая фаза содержит белок.

Процедура выделения является развитием одноэтапного метода выделения РНК с использованием фенола и гуанидинизотиоцианата, разработанного Chomczynski и Sacchi.

Методика проведения выделения

1. Исходный биологический образец смешивают с RNA-XPress Reagent.
2. Для разделения компонентов добавляют хлороформ.
3. Смесь центрифугируют.
4. После центрифугирования получают три фазы: водную фазу с РНК, межфазный слой с ДНК и органическую фазу с белком.
5. РНК выделяют из водной фазы.

Полная процедура выделения общей РНК из свежих тканей и клеток занимает около 1 ч.

Требования к объёму образца

Расход реагента: 1 мл RNA-XPress Reagent достаточно для выделения РНК из:

• 50–100 мг ткани;
• 5–10 × 10⁶ клеток;
• поверхности культуральной чашки площадью 10 см² — для клеток, выращенных в монослое.

Технические характеристики

• Наименование: RNA-XPress Reagent
• Артикул: MB601-100ML
• Производитель: HiMedia
• Назначение: выделение общей РНК
• Объём: 100 мл
• Тип раствора: однофазный
• Основные компоненты: тиоцианат гуанидина и фенол
• Дополнительный реагент для разделения фаз: хлороформ
• Количество фаз после центрифугирования: 3
• Водная фаза: РНК
• Межфазный слой: ДНК
• Органическая фаза: белок
• Время выполнения процедуры: около 1 ч при работе со свежими тканями и клетками
• Метод экстракции: фенольно-хлороформная экстракция
• Конечный материал: общая РНК для количественного определения экспрессии генов и Нозерн-блоттинга

Сравнительный методический контекст

RNA-XPress Reagent применяется в развитии одноэтапного метода выделения РНК с использованием фенола и гуанидинизотиоцианата, разработанного Chomczynski и Sacchi; в отличие от описания исходного одноэтапного подхода, процедура предусматривает разделение смеси на водную, межфазную и органическую фазы после добавления хлороформа и центрифугирования.