HiPurA® HP грибковый ДНК набор для очистки (following bead beating method) HiMedia MB576-50PR (50 преп.)

Набор HiPurA® HP для очистки грибковой ДНК с использованием механического разрушения шариками, HiMedia MB576-50PR (50 преп.), предназначен для разрушения плотных клеточных стенок грибковых образцов. Набор применяют для выделения ДНК из свежей грибковой ткани в молекулярно-диагностических исследованиях и скрининге; методика рассчитана на исходную пробу массой не более 300 мг во влажном состоянии.

Принцип выделения ДНК

Клеточные стенки грибов разрушаются физическим методом — механическим измельчением шариками. Для выделения ДНК из свежих образцов используют процедуру с центрифужной колонкой. Буфер для экстракции грибковой ДНК HP содержит CTAB (бромид цетилтриметиламмония) — детергент, который разрушает клетки и солюбилизирует их содержимое.

Методика выделения

1. Поместите свежий образец массой не более 300 мг во влажном состоянии в пробирку HiBead и добавьте буфер для экстракции грибковой ДНК HP.
2. Выполните механическое разрушение образца шариками для вскрытия клеток и высвобождения их содержимого.
3. Для удаления хлорофилла и части денатурированных белков из зелёной растительной ткани обработайте экстракт смесью хлороформа и изоамилового спирта. Разделите органическую фазу центрифугированием.
4. Поскольку экстракт содержит ДНК и РНК, при необходимости удалите РНК добавлением РНКазы A.
5. Смешайте фракцию, прошедшую через колонку, с раствором, усиливающим связывание ДНК с колонкой.
6. Нанесите раствор на мини-колонку HiElute для очистки методом центрифугирования с крышкой.
7. Выполните этапы промывки для удаления следовых загрязнений.
8. Элюируйте ДНК элюирующим буфером ET, входящим в набор.