Среда для испытания антибиотика (M-AOAC) HiMedia M992-500G (уп/500 гр)

Сухая питательная среда для испытания антибиотика (M-AOAC) HiMedia M992-500G, предназначенная для микробиологического анализа лазалоцида. В качестве тест-организма используется Bacillus subtilis; состав среды соответствует стандартам AOAC.

Область применения

Среда рекомендуется для количественного определения содержания лазалоцида в кормах методом микробиологического анализа с использованием штамма Bacillus subtilis (ATCC 6633). Применяется для анализа фармацевтических образцов.

Принцип измерения и интерпретация

Среда M сформулирована в соответствии с методикой AOAC для анализа лазалоцида в кормах. Принцип основан на определении зон ингибирования роста тест-культуры Bacillus subtilis (ATCC 6633).

Подготовка тест-культуры

1. Подготовьте скошенную культуру Bacillus subtilis (ATCC 6633) на среде Assay Medium No. 1; инкубируйте 16–24 часа при 37 °C.
2. Промойте рост стерильной дистиллированной водой, перенесите на поверхность среды Assay Medium No. 32 и инкубируйте при 37 °C в течение 7 дней.
3. Повторно промойте рост стерильной дистиллированной водой.
4. Нагрейте пробу в водяной бане при 65 °C в течение 30 минут.
5. Центрифугируйте, слейте супернатант и ресуспендируйте клетки. Повторите процедуру нагрева в водяной бане в течение 3 минут.
6. Разбавьте суспензию стерильной дистиллированной водой (1:50) до достижения значения 20 %T на спектрофотометре при 530 нм перед использованием.

Проведение анализа

1. Используйте однослойный инокулированный агар. Оптимальная концентрация суспензии Bacillus subtilis определяется перед анализом: при добавлении в среду M должна формироваться зона ингибирования размером 17,5 ± 2,5 мм при концентрации 1,0 мкг/мл.
2. Добавьте рассчитанное количество суспензии в стерильную расплавленную среду M (pH 6,0). Перемешайте и разлейте по 6 мл в каждую чашку Петри. Чашки готовят за 2,5–3 часа до использования.
3. Подготовка пробы: взвесьте 1,0 г премикса, перенесите в колбу, добавьте 100 мл метанола. Интенсивно встряхивайте 3 минуты, затем разбавьте метанолом.
4. Последовательное разведение: 4 мл полученного раствора доведите до 100 мл метанолом $\rightarrow$ 3 мл этого раствора разбавьте 22 мл метанола и водой до 100 мл (1 мл $\approx$ мкг лазалоцида Na/мл в 25 % метаноле).
5. Приведите конечную концентрацию корма до 0,0075 %.
6. Используя лазалоцид натрия, постройте стандартную кривую отклика и подготовьте аналитический раствор.
7. Разместите цилиндры на каждой чашке, заполняя их попеременно эталонной и стандартными концентрациями. Инкубируйте при 35–36 °C.
8. Рассчитайте диаметры зон для низкой (L) и высокой (H) концентраций стандартной кривой, соединив их прямой линией. Эта скорректированная точка используется для расчетов образца.
9. Вычислите среднее значение по 9 измерениям эталонной концентрации и 9 измерениям аналитического раствора.
10. Если среднее значение аналитического раствора выше эталонного, прибавьте разницу к референсной точке на стандартной кривой; если ниже — вычтите разницу. На основании скорректированного значения определяется количество антибиотика.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Общие параметры:

Контроль качества:

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 2,0 % агаром.
• Цвет и прозрачность: желтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель в чашках Петри.
• Реакция: pH 3,36 % (масса/объем) водного раствора при 25 °C составляет 6,0 ± 0,2.
• Диапазон pH: 5,80–6,20.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Инструкции по приготовлению

1. Суспендируйте 33,64 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$ 0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.
• Ограничения: необходимо использовать только свежеприготовленные чашки с средой, иначе возможны ошибочные результаты.

Меры предосторожности и утилизация

• Требования к безопасности: использовать защитные перчатки, одежду, средства защиты глаз и лица. Соблюдать правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• Утилизация: загрязненные материалы и использованные среды подлежат обязательному автоклавированию или сжиганию перед утилизацией в соответствии с лабораторными протоколами по обращению с инфекционными материалами.