Среда для испытания антибиотика (M-AOAC) HiMedia M992-500G (уп/500 гр)

Сухая питательная среда «Среда для испытания антибиотика (M-AOAC) HiMedia M992-500G (уп/500 гр)» производства HiMedia предназначена для микробиологического анализа ласалоцида с использованием Bacillus subtilis и имеет конечный pH 6,0 ± 0,2. Среда применяется для анализа фармацевтических образцов, при этом для получения корректных результатов необходимо использовать свежеприготовленные чашки со средой.

Назначение

Среда рекомендована для микробиологического испытания ласалоцида с использованием Bacillus subtilis в качестве тест-организма. Тип образца: фармацевтический образец.

Среда Antibiotic Assay Medium M разработана в соответствии с методикой AOAC для микробиологического анализа ласалоцида в кормах.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами рабочих характеристик.

Приготовление среды

1. При суспендировании растворите 33,64 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм² (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип и интерпретация анализа

Для определения ласалоцида используют Bacillus subtilis ATCC 6633 в качестве тест-организма. Подготовка тест-культуры выполняется следующим образом:

1. Приготовьте посев на скошенной поверхности среды для анализа № 1 и инкубируйте культуру при 37 °C в течение 16–24 ч.
2. Смойте выросшую культуру стерильной дистиллированной водой и перенесите суспензию на поверхность среды для анализа № 32.
3. Инкубируйте при 37 °C в течение 7 суток.
4. Смойте выросшую культуру стерильной дистиллированной водой.
5. Нагревайте суспензию на водяной бане при 65 °C в течение 30 мин.
6. Центрифугируйте суспензию, удалите надосадочную жидкость и ресуспендируйте клетки.
7. Повторно выдерживайте суспензию на водяной бане в течение 3 мин.
8. Разведите суспензию стерильной дистиллированной водой в соотношении 1 + 50 так, чтобы перед использованием показание на спектрофотометре при длине волны 530 нм составляло 20 %T.

Используют один слой агара с инокулятом. До проведения анализа определяют оптимальную концентрацию суспензии Bacillus subtilis, которую добавляют в среду M для получения зоны ингибирования требуемого размера: 17,5 ± 2,5 мм при концентрации 1,0 мкг/мл.

Для фактического анализа:

1. Добавьте необходимое количество суспензии в стерильную расплавленную среду M с pH 6,0.
2. Перемешайте суспензию со средой.
3. Внесите по 6 мл среды в каждую чашку.
4. Подготовьте чашки за 2,5–3 ч до использования.

Подготовка образца и раствора ласалоцида

1. Взвесьте 1,0 г премикса.
2. Перенесите премикс в колбу и добавьте 100 мл метанола.
3. Энергично встряхивайте в течение 3 мин.
4. Разведите полученный раствор метанолом.
5. Отберите 4 мл полученного раствора и доведите объём метанолом до 100 мл.
6. Далее отберите 3 мл раствора и доведите объём до 100 мл смесью из 22 мл метанола и воды.
7. Приготовьте конечную концентрацию образца корма 0,0075 %.

В исходной методике производителя приведено соотношение для раствора: 1 мл соответствует приблизительно содержанию ласалоцида натрия в 25%-ном метаноле; числовое значение содержания в исходных данных указано неразборчиво. Подробности методики следует сверять с официальным методом AOAC.

Построение стандартной линии и расчёт

С использованием ласалоцида натрия получают стандартную линию отклика и раствор для анализа.

1. Разместите цилиндры на каждой чашке.
2. Поочерёдно заполните цилиндры раствором сравниваемой концентрации и другим стандартным раствором.
3. Инкубируйте чашки при 35–36 °C.
4. Рассчитайте диаметры зон для концентрации L — наименьшей концентрации, формирующей измеряемую зону, — и концентрации H — наибольшей концентрации стандартной линии отклика.
5. Соедините рассчитанные точки прямой линией.
6. Используйте скорректированную точку сравнения для расчёта содержания в образце.
7. Усредните 9 показаний для раствора сравнения и 9 показаний для раствора анализа.
8. Если среднее значение для раствора анализа больше среднего значения для раствора сравнения, прибавьте разницу между ними к точке сравнения на стандартной линии отклика.
9. Если среднее значение для раствора анализа меньше среднего значения для раствора сравнения, вычтите разницу из точки сравнения.
10. По скорректированному значению раствора анализа определите количество антибиотика.

Контроль качества

Внешний вид

Кремовый или жёлтый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 2,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель жёлтого цвета.

Реакция

Реакция 3,36%-ного водного раствора при 25 °C: pH 6,0 ± 0,2.

Значение pH

pH: 5,80–6,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Технические характеристики

• Назначение: микробиологическое испытание антибиотика, анализ ласалоцида
• Тест-организм: Bacillus subtilis
• Тип образца: фармацевтический образец
• Физическая форма: порошок
• Конечный pH при 25 °C: 6,0 ± 0,2
• pH 3,36%-ного водного раствора: 5,80–6,20
• Тип продукта: стандартный
• Происхождение компонентов: без компонентов животного происхождения, микробиологического происхождения
• Материал упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Фасовка: 500 г
• Сертификат: ФСЗ 2009/03707

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения: 10–30 °C
• Условия хранения: в плотно закрытой ёмкости, в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения
• Состояние среды после вскрытия: хранить в сухом виде, плотно закрывая флакон после каждого использования
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке