Среда для испытания антибиотика HiMedia M991-500G (уп/500 гр)

Питательная среда «Среда для испытания антибиотика HiMedia M991-500G (уп/500 гр)» — сухая микробиологическая среда L-AOAC для определения монензина с использованием Bacillus subtilis. Среда применяется для микробиологического испытания антибиотика в образцах кормов; свежеприготовленные чашки со средой необходимо использовать непосредственно после приготовления, поскольку применение несвежих чашек может привести к ошибочным результатам.

Назначение

Среда рекомендована для микробиологического испытания монензина с использованием Bacillus subtilis в качестве тест-организма. Применяется в методике определения монензина в кормах.

Тип образца: фармацевтический образец.

Состав

Формула среды приведена в соответствии с требованиями к показателям эффективности и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип измерения и интерпретация

Среда Antibiotic Assay Medium L разработана в соответствии с методикой AOAC для микробиологического испытания монензина в кормах с использованием Bacillus subtilis ATCC 6633 в качестве тест-организма.

Используется один слой агара с внесённой посевной культурой. Оптимальную концентрацию суспензии Bacillus subtilis необходимо предварительно определить перед испытанием на пробных чашках. Обычно используют 0,5 мл суспензии на 100 мл затравочного агара, чтобы получить зоны ингибирования подходящего диаметра: 17,5 ± 2,5 мм при концентрации монензина 0,5 мкг/мл.

Для основного испытания соответствующее количество суспензии вносят в стерильную расплавленную среду, тщательно перемешивают и разливают по 6 мл в стерильные чашки Петри. Чашки закрывают и перед использованием охлаждают в холодильнике приблизительно 1 ч.

Для построения стандартного графика или линий отклика готовят разведения с использованием 50 % метанола до концентраций монензина 0,25, 0,5, 1,0 и 2,0 мкг/мл. Референтная концентрация составляет 0,5 мкг/мл.

Методика проведения анализа

1. Подготовьте среду, приготовьте затравочный агар с суспензией Bacillus subtilis и определите оптимальную концентрацию суспензии на пробных чашках.
2. Внесите подходящее количество суспензии в стерильную расплавленную среду, перемешайте и разлейте по 6 мл в стерильные чашки Петри.
3. Закройте чашки и выдержите их в холодильнике около 1 ч перед использованием.
4. Для построения стандартной кривой приготовьте растворы монензина в 50 % метаноле с концентрациями 0,25, 0,5, 1,0 и 2,0 мкг/мл. Используйте концентрацию 0,5 мкг/мл в качестве референтной.
5. Для получения стандартной кривой используйте 10 чашек с посевным агаром и установите в них цилиндры.
6. Заполните цилиндры стандартными растворами различных концентраций.
7. Инкубируйте чашки при 35–37 °C в течение 16–18 ч.
8. Измерьте диаметры зон ингибирования.
9. Взвесьте 20 г готового корма и 5 г премикса, затем внесите образец в хроматографическую колонку.
10. Элюируйте образец смесью метанола и воды в соотношении 9:1.
11. Получите 200 мл элюата и повторно разбавьте его 50 % метанолом до концентрации монензина 0,5 мкг/мл. Полученный раствор называют аналитическим раствором.
12. Используйте по 5 чашек для каждого аналитического раствора.
13. После инкубации при 35–37 °C в течение 16–18 ч заполните чередующиеся цилиндры референтным раствором и аналитическим раствором.
14. Измерьте диаметры зон ингибирования с точностью до 0,1 мм.
15. Рассчитайте средние значения для 10 показаний референтной концентрации, 10 показаний референтной концентрации и 10 показаний аналитического раствора, как указано в методике производителя.
16. Если средний результат для аналитического раствора больше результата для референтной концентрации, прибавьте разницу между ними к точке референтной концентрации на стандартной кривой.
17. Если результат для аналитического раствора меньше результата для референтной концентрации, вычтите разницу между ними из точки референтной концентрации.
18. По скорректированному значению аналитического раствора определите количество антибиотика.

Приготовление среды

1. Взвесьте 28,64 г сухой среды.
2. Суспендируйте навеску в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
3. Нагрейте до кипения и полностью растворите среду.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный, легко сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется жёлтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.

Реакция

Реакция: для водного раствора с концентрацией 2,86 % масс./об. при 25 °C.

pH: 6,0 ± 0,2.

Диапазон pH: 5,80–6,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 16–18 ч.

Обозначение *: соответствующие номера WDCM.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения: 10–30 °C.
• Условия хранения: в плотно закрытом контейнере.
• Состояние при использовании: среда должна быть свежеприготовленной.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия контейнера продукт необходимо хранить в сухом виде, плотно закрывая ёмкость для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Место хранения: сухая вентилируемая зона, защищённая от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования контейнер необходимо плотно закрывать.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение указанного срока