Среда для испытания антибиотика HiMedia M991-500G (уп/500 гр)

Сухая питательная среда для испытания антибиотика HiMedia M991-500G (уп/500 г), предназначенная для микробиологического анализа монензина. Рекомендуется к использованию с тест-организмом Bacillus subtilis; состав соответствует стандарту AOAC.

Область применения

Среда используется для количественного определения содержания монензина в кормах с помощью микробиологического метода анализа. Применяется для анализа фармацевтических образцов.

Принцип измерения и интерпретация

Среда Antibiotic Assay Medium L разработана в соответствии с методикой AOAC для анализа монензина в кормах с использованием Bacillus subtilis (ATCC 6633) в качестве тест-организма.

Методика проведения анализа

1. Подготовка посевного слоя: Используется один слой инокулированного агара. Оптимальная концентрация суспензии Bacillus subtilis определяется предварительно на пробных пластинах. Обычно на 100 мл стерильного расплавленного агара добавляют 0,5 мл суспензии для получения зон задержки роста диаметром 17,5 ± 2,5 мм при концентрации антибиотика 0,5 мкг/мл.
2. Посев: Добавляют необходимый объем суспензии в стерильный расплавленный агар, перемешивают и разливают по 6 мл в стерильные чашки Петри. Перед использованием пластины накрывают и выдерживают в холодильнике около 1 часа.
3. Построение стандартного графика:
   • Готовят разведения с использованием 50 % метанола для получения концентраций монензина: 0,25; 0,5; 1,0 и 2,0 мкг/мл.
   • Концентрация reference (эталонная): 0,5 мкг/мл.
   • Используют 10 посевных агаровых пластин с установленными цилиндрами, в которые заливают стандартные концентрации.
   • Инкубируют при 35–37 °C в течение 16–18 часов и измеряют диаметры зон задержки роста.
4. Анализ образца:
   • Взвешивают 20 г готового корма или 5 г премикса, помещают в хроматографическую колонку.
   • Элюируют смесью метанол:вода в соотношении 9:1.
   • 200 мл элюата дополнительно разбавляют 50 % метанолом до концентрации 0,5 мкг монензина/мл (анализируемый раствор).
   • Для каждого анализируемого раствора используют 5 пластин.
   • В цилиндры поочередно заливают эталонную концентрацию и анализируемый раствор.
5. Расчет:
   • После инкубации (35–37 °C, 16–18 часов) измеряют диаметры зон задержки роста с точностью до 0,1 мм.
   • Вычисляют среднее значение для 10 измерений эталона и 10 измерений анализируемого раствора.
   • Если среднее значение анализируемого раствора больше эталонного, разница прибавляется к эталонной точке на стандартной кривой. Если меньше — разница вычитается.
   • На основании скорректированного значения определяют количество антибиотика.

Приготовление и стерилизация

1. Суспендировать 28,64 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Общие параметры

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободнотекучий порошок от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность: в чашках Петри образуется желтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• Реакция: pH 2,86 % (масса/объем) водного раствора при 25 °C составляет 6,0 ± 0,2.
• Диапазон pH: 5,80–6,20.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 16–18 часов.

* Соответствующие номера WDCM.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников воспламенения и экстремальных температур.
• Ограничения: необходимо использовать только свежеприготовленные среды, так как использование старых пластин может привести к ошибочным результатам.

Меры предосторожности и утилизация

• Безопасность: использовать защитные перчатки, спецодежду, средства защиты глаз и лица. Соблюдать правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• Утилизация: загрязненные материалы и использованные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты сжиганию перед утилизацией в соответствии с лабораторными протоколами.