HiMedia M987I-500G Модифицированная лактозо-желатиновая среда

Модифицированная лактозо-желатиновая среда HiMedia M987I-500G предназначена для обнаружения и количественного учёта Clostridium perfringens в образцах пищевых продуктов. Состав и критерии эффективности среды соответствуют международным стандартам ISO 7937:2004 и ISO 11133:2014 (Amd 2: 2020).

Принцип измерения и интерпретация

Среда модифицированная лактозо-желатиновая разработана в соответствии с рекомендациями APHA и FDA для выявления и подсчёта колоний Clostridium perfringens в пищевых продуктах.

Принцип работы основан на следующем:

• Питательная основа: триптоза и дрожжевой экстракт обеспечивают необходимые питательные вещества для роста микроорганизмов.
• Ферментация: лактоза служит ферментируемым сахаром.
• Индикация: феноловый красный выступает в роли индикатора ферментации; при производстве кислоты цвет среды меняется с красного на жёлтый.
• Разжижение желатина: после инкубации пробирки охлаждают при 5 °C в течение 1 часа. Если среда застыла, её инкубируют дополнительно 24 часа для проверки способности микроорганизмов разжижать желатин.

Методика проведения анализа

Пробоподготовка и первичный посев

1. Пре-инкубация: образцы инкубируют в анаэробных условиях при 37 °C в течение 18–24 ч.
2. Посев: колонии высевают на агар Perfringens (T.S.C.) (M8371), добавляя слой из 10 мл того же агара.
3. Инкубация: plates инкубируют в анаэробных условиях при 37 °C в течение 18–24 ч.
4. Отбор: с каждой чашки выбирают как минимум одну характерную, хорошо отделённую колонию. При необходимости процедуру повторяют до получения изолированных чёрных колоний.

Подтверждающий анализ (использование среды M987I)

1. Инокуляция: каждую выбранную колонию переносят в свежеприготовленную деаэрированную лактозо-желатиновую среду.
2. Инкубация: пробирки выдерживают в анаэробных условиях при 37 °C в течение 24 ч.
3. Оценка: проверяют наличие газа и жёлтого окрашивания (признак ферментации лактозы с образованием кислоты).
4. Проверка разжижения: пробирки охлаждают при 5 °C в течение 1 ч. Если среда застыла, проводят повторную инкубацию в течение 24 ч и снова проверяют разжижение желатина.
5. Дополнительный этап: после инкубации без задержки переносят 5 капель культуры в бульон лактозо-сульфитный (M1287) с помощью стерильной пипетки. Инкубируют в водяной бане при 46 °C в аэробных условиях в течение 18–24 ч.

Приготовление и стерилизация

1. Растворить 15,5 г порошка в 100 мл тёплой очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Разлить по 10 мл в пробирки с завинчивающимися крышками размером 15×150 мм.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C и давлении $\approx$0,1 МПа (15 lbs) в течение 15 минут.
5. Непосредственно перед использованием среду снова нагревают до кипения для удаления растворенного кислорода и быстро охлаждают до температуры инкубации.

Технические характеристики

Состав среды

Спецификация ISO (Lactose-gelatin medium), г/л:

Модифицированная среда M987I (Lactose Gelatin Medium, Modified), г/л:

Примечание: формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности. Триптоза эквивалентна ферментному гидролизату казеина.

Общие параметры

Контроль качества и культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 30–35 °C в течение 24–48 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом месте, вдали от источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре 15–25 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание комкования.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.
• Ограничение: неиспользованную приготовленную среду следует утилизировать через 3 недели после приготовления.

Меры предосторожности и утилизация

• Перед вскрытием контейнера ознакомиться с этикеткой. Использовать защитные перчатки, спецодежду и средства защиты глаз и лица.
• Соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности при работе с образцами и культурами.
• Утилизация: использованные или непригодные препараты подлежат безопасному удалению путем автоклавирования и/или сжигания в соответствии с лабораторными протоколами по деконтаминации инфекционных материалов.