HiMedia M987I-500G Модифицированная лактозо-желатиновая среда

Питательная среда HiMedia M987I-500G Модифицированная лактозо-желатиновая среда — порошковая культуральная среда для выявления и количественного определения Clostridium perfringens в пищевых продуктах. Среда применяется в микробиологическом контроле пищевых образцов и хранится при 10–30 °C в плотно закрытой таре.

Назначение

Среда рекомендована для выявления и количественного определения Clostridium perfringens в пищевых образцах. Состав и показатели эффективности соответствуют ISO 7937:2004 и ISO 11133:2014, включая поправку Amd 2:2020.

• Тип изделия: питательная среда
• Производитель: HiMedia
• Артикул: M987I-500G
• Масса: 500 г
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности)
• Происхождение: животное

Состав

ISO-спецификация: лактозо-желатиновая среда

Состав на 1 л:

M9871: модифицированная лактозо-желатиновая среда

** Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с показателями эффективности.
# Эквивалент ферментативного гидролизата казеина.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 15,5 г порошка в 100 мл тёплой очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду по 10 мл в пробирки размером 15 × 150 мм с завинчивающимися крышками.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Непосредственно перед использованием нагрейте среду до кипения для удаления растворённого кислорода.
6. Быстро охладите среду до температуры инкубации.

Принцип действия и интерпретация

Модифицированная лактозо-желатиновая среда приготовлена в соответствии с рекомендациями APHA и рекомендована FDA для выявления и подсчёта колоний Clostridium perfringens в пищевых продуктах. Формула также рекомендована комитетом ISO для количественного определения Clostridium perfringens.

• Триптоза и дрожжевой экстракт обеспечивают микроорганизмы необходимыми питательными веществами для роста.
• Лактоза является сбраживаемым сахаром.
• Феноловый красный служит индикатором ферментации: при образовании кислоты окраска среды изменяется с красной на жёлтую.
• Пробирку охлаждают в течение 1 ч при 5 °C; если среда застыла, пробирку дополнительно инкубируют 24 ч для оценки разжижения желатина.
• Среду инокулируют уколом чистой культуры из жидкой тиогликолевой среды или изолятами с чашки с триптозо-сульфит-циклосериновым агаром (TSC).

Тип образца

• Пищевые образцы.

Отбор и обработка образцов

Предварительное обогащение

1. Инкубируйте образец в анаэробных условиях при 37 °C в течение 18–24 ч.
2. Выполните посев штрихом на основу агара для Clostridium perfringens (TSC), M8371.
3. Налейте поверх посева 10 мл основы агара для Clostridium perfringens (TSC).
4. Дайте среде затвердеть и инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C в течение 18–24 ч.
5. С каждой чашки отберите не менее одной характерной, хорошо изолированной колонии.
6. При необходимости повторяйте рассев и инокуляцию на чашках с основой агара для Clostridium perfringens (TSC), пока не будут получены хорошо изолированные характерные чёрные колонии.

Подтверждение

1. Инокулируйте каждую отобранную колонию в свежеподготовленную дегазированную лактозо-желатиновую среду.
2. Инкубируйте в анаэробных условиях при 37 °C в течение 24 ч.
3. Осмотрите пробирки с лактозо-желатиновой средой на наличие газа и жёлтой окраски, обусловленной образованием кислоты; признаки указывают на ферментацию лактозы.
4. Охладите пробирки в течение 1 ч при 5 °C и проверьте разжижение желатина.
5. Если среда затвердела, повторно инкубируйте пробирки ещё 24 ч и снова проверьте разжижение желатина.
6. После инкубации без задержки перенесите 5 капель тиогликолевой культуры в основу сульфитного бульона с лактозой (M1287), используя стерильную пипетку.
7. Инкубируйте аэробно при 46 °C в течение 18–24 ч на водяной бане.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный крупнозернистый порошок от бежевого до красновато-розового цвета.

Гелеобразование

Полутвёрдый гель, сопоставимый с 12%-ным желатиновым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 15,5 % при 25 °C:

• pH: 7,5 ± 0,2.

pH

• Диапазон pH: 7,30–7,70.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 30–35 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 15–25 °C.
• Условия хранения: плотно закрытая тара.
• Использование: до истечения срока годности, указанного на этикетке.
• После вскрытия плотно закрывайте флакон и храните продукт в сухом виде для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Место хранения: сухое, хорошо вентилируемое помещение, защищённое от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывайте контейнер.
• Неиспользованную приготовленную среду следует утилизировать через 3 недели после приготовления.
• Эффективность продукта обеспечивается при применении согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованном температурном диапазоне.

Меры предосторожности

• Перед вскрытием контейнера прочитайте этикетку.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с утверждёнными руководствами.
• Для получения указаний по безопасности используйте соответствующие паспорта безопасности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо безопасно утилизировать автоклавированием и/или сжиганием. Соблюдайте установленные лабораторные процедуры обращения с инфекционными материалами. Материалы, контактировавшие с образцом, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Методическая основа

Состав и применение среды связаны с методами APHA, FDA и ISO для выявления и количественного определения Clostridium perfringens в пищевых продуктах. ISO 7937:2004 и ISO 11133:2014, Amd 2:2020 используются как нормативная основа для состава и оценки эффективности среды.