HiMedia M847-100G Среда для определения подвижности-индола-лизина (MIL)

Питательная микробиологическая среда HiMedia M847-100G Среда для определения подвижности-индола-лизина (MIL) производства HiMedia с конечным pH 6,6±0,2 предназначена для дифференциальной идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae. Среда позволяет одновременно оценивать подвижность, декарбоксилирование и дезаминирование лизина, а также образование индола в одной пробирке.

Назначение

Среда рекомендована для идентификации представителей Enterobacteriaceae по подвижности, декарбоксилазной активности в отношении лизина, дезаминазной активности в отношении лизина и продукции индола.

Тип образца: выделенные микроорганизмы из клинических и неклинических образцов.

Применение: диагностика in vitro, только для профессионального использования.

Состав

Состав, г/л:

Характеристики состава по данным производителя

Принцип действия и интерпретация

Среда MIL приготовлена по рецептуре Reller и Merrett. Среда предназначена для идентификации Enterobacteriaceae и обеспечивает четыре дифференциальные реакции в одной пробирке с посевом.

Среду рекомендуется использовать совместно с трёхсахарным железным агаром (TSI, M021) и мочевинным агаром (M112) для предварительной идентификации представителей Enterobacteriaceae в фекальных образцах.

Пептон, триптон и дрожжевой экстракт поставляют аминокислоты и другие сложные азотистые вещества. Декстроза служит источником энергии. Небольшое количество агара добавлено для выявления подвижности по линии укола.

Подвижные микроорганизмы растут с распространением от линии посева, тогда как неподвижные микроорганизмы растут только вдоль линии укола. Пурпурный бромкрезол используется как индикатор pH.

При посеве микроорганизма, ферментирующего декстрозу, образуются кислоты, снижающие pH и вызывающие изменение окраски индикатора в среде с пурпурной на жёлтую. Кислая реакция также стимулирует активность ферментов-декарбоксилаз.

Микроорганизмы, обладающие специфической декарбоксилазой, разлагают аминокислоту, содержащуюся в среде, с образованием соответствующего амина. При декарбоксилировании лизина образуется кадаверин. Образование аминов повышает pH и вызывает возврат окраски среды в нижней части пробирки к пурпурной.

Среда в верхней части пробирки остаётся кислой вследствие более высокого содержания кислорода. Если исследуемый микроорганизм не вырабатывает необходимую декарбоксилазу, среда остаётся жёлтой, то есть кислой, по всему объёму либо становится жёлтой с пурпурной или красной реакцией в верхней части.

Дезаминирование лизина вызывает изменение окраски в верхней части среды. При окислительном дезаминировании лизина образуется соединение, реагирующее с цитратом аммония железа с образованием бордово-красной или красно-коричневой окраски в верхнем сантиметре среды; нижняя часть среды остаётся кислой.

Реакцию дезаминирования можно выявить только в случае, если лизиндекарбоксилаза не образуется; это характерно для видов Proteus, Morganella и Providencia.

Индол образуется в среде микроорганизмами, обладающими ферментом триптофаназой. Триптофаназа расщепляет триптофан, содержащийся в казеиновом пептоне, с образованием индола. Индол выявляют добавлением реактива Ковача на поверхность агара. Индол взаимодействует с пара-диметиламинобензальдегидом реактива Ковача с образованием красного комплекса.

Методика приготовления и проведения анализа

1. Приготовьте суспензию 36,52 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду по пробиркам порциями по 5 мл.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов, что соответствует приблизительно 0,103 МПа или 1,03 бар, при 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки в вертикальном положении до 45–50 °C.
6. Выполните посев культуры уколом.
7. Инкубируйте посевы при 37 °C в течение 18–24 ч.
8. Оцените подвижность, дезаминирование лизина и декарбоксилирование лизина до исследования реакции на индол.
9. Для определения индола добавьте реактив Ковача на поверхность агара и оцените образование красного кольца или красного комплекса.

Реакции на подвижность, дезаминирование лизина и декарбоксилирование лизина необходимо оценивать до реакции на индол. Добавление реактива Ковача окрашивает среду в жёлтый цвет, поэтому положительная реакция декарбоксилазы лизина может быть ошибочно интерпретирована как отрицательная.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до зеленовато-жёлтого цвета.

Гелеобразование

Полужидкая среда, сопоставимая с 0,2 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде столбиков образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красновато-пурпурного цвета.

Реакция

Реакция 3,65 % мас./об. водного раствора при 25 °C: pH 6,6±0,2.

pH

Диапазон pH: 6,40–6,80.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.