HiMedia M847-100G Среда для определения подвижности-индола-лизина (MIL)

Сухая питательная среда для определения подвижности-индола-лизина (MIL) HiMedia M847-100G предназначена для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae. Среда позволяет одновременно оценить подвижность микроорганизмов, активность лизин-декарбоксилазы, лизин-дезаминазы и способность к продукции индола.

Область применения

Среда рекомендуется для идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae на основе анализа четырех дифференциальных реакций в одной пробирке. Для проведения презумптивной идентификации возбудителей из фекальных образцов рекомендуется использовать MIL-среду совместно с трёхсахарным железным агаром (TSI) (M021) и мочевинным агаром (M112).

Принцип измерения и интерпретация результатов

Среда подготовлена по формуле Реллера и Меретта.

Компоненты и их функции

• Пептон, триптон и дрожжевой экстракт: обеспечивают микроорганизмы аминокислотами и сложными азотистыми веществами.
• Декстроза (глюкоза): служит источником энергии.
• Агар: добавлен в малом количестве для визуализации подвижности вдоль линии инокуляции.
• Бромкрезоловый пурпурный: служит pH-индикатором.

Анализ реакций

1. Подвижность: рост подвижных организмов распространяется за пределы линии инокуляции (прокола), неподвижные растут строго вдоль линии.
2. Ферментация глюкозы и лизин-декарбоксилаза: при ферментации глюкозы образуются кислоты, pH снижается, и индикатор меняет цвет с пурпурного на жёлтый. Кислый pH стимулирует активность фермента декарбоксилазы. Организмы, обладающие специфической декарбоксилазой, расщепляют лизин с образованием амина (кадаверина), что повышает pH. В результате нижняя часть пробирки снова приобретает пурпурный цвет. Верхняя часть остаётся кислой (жёлтой) из-за более высокого содержания кислорода. Если декарбоксилаза отсутствует, среда остаётся жёлтой по всей длине или жёлтой с пурпурной/красной реакцией у поверхности.
3. Лизин-дезаминаза: окислительное дезаминирование лизина приводит к образованию соединения, которое реагирует с цитратом аммония-железа(III), окрашивая верхний сантиметр среды в бордово-красный или красно-коричневый цвет (нижняя часть при этом остаётся кислой). Реакция обнаруживается только при отсутствии лизин-декарбоксилазы (характерно для видов Proteus, Morganella и Providencia).
4. Продукция индола: организмы, обладающие триптофаназой, расщепляют триптофан (из казеинового пептона) с образованием индола. Индол обнаруживается путем добавления реагента Ковакса на поверхность агара: при взаимодействии с п-диметиламинобензальдегидом образуется красный комплекс.

Методика проведения анализа

1. Приготовление среды: 36,52 г порошка суспендируют в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды. Нагревают до кипения для полного растворения.
2. Розлив: распределяют по пробиркам по 5 мл.
3. Стерилизация: автоклавируют при температуре 121 °C и давлении $\approx$0,1 МПа (15 psi) в течение 15 минут.
4. Охлаждение: пробирки охлаждают в вертикальном положении до 45–50 °C.
5. Инокуляция: проводят посев методом «прокола» (stab-inoculation).
6. Инкубация: выдерживают при 37 °C в течение 18–24 часов.
7. Оценка: сначала оценивают подвижность, дезаминирование и декарбоксилирование лизина, и только затем проводят тест на индол.

Важное ограничение: реагент Ковакса окрашивает среду в жёлтый цвет, что может привести к ошибочной интерпретации положительной реакции лизин-декарбоксилазы как отрицательной.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Физико-химические свойства

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до зеленовато-жёлтого цвета.
• Желирование: полутвердый гель, сопоставим с 0,2 % раствором агара.
• Цвет и прозрачность готовой среды: красно-пурпурный прозрачный или слегка опалесцирующий гель (в виде столбика в пробирке).
• pH водного раствора (3,65 % м/об при 25 °C): 6,40–6,80.

Общие параметры

Культуральные характеристики

Результаты наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

• Только для диагностики in vitro и профессионального использования.
• При работе использовать средства индивидуальной защиты: перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Утилизация: загрязненные материалы и использованные среды подлежат обязательному автоклавированию или сжиганию в соответствии с лабораторными протоколами работы с инфекционными материалами.