HiMedia M826-100G Среда Хью-Лейфсона

Сухая питательная среда HiMedia M826-100G Среда Хью-Лейфсона для определения аэробного и анаэробного расщепления глюкозы. Применяется для дифференциации грамотрицательных кишечных бактерий по типу метаболизма углеводов (окисление или ферментация); вес упаковки 100 г.

Принцип измерения

Среда Хью-Лейфсона предназначена для определения таксономической значимости ферментативного и окислительного метаболизма углеводов у грамотрицательных кишечных бактерий. Существует два способа утилизации углеводов микроорганизмами: ферментация и окисление.

В среде содержится высокая концентрация углеводов и низкая концентрация пептона, что предотвращает использование пептона аэробными организмами и последующее создание щелочной среды, которая могла бы нейтрализовать слабую кислотность, создаваемую окислительным организмом. Дикалийфосфат способствует ферментации и выполняет роль pH-контролирующего буфера. Концентрация агара позволяет определять подвижность микроорганизмов и способствует равномерному распределению кислоты по всей трубке. В качестве pH-индикатора используется бромтимоловый синий.

Методика проведения анализа

Подготовка образца

В качестве образца используются изолированные микроорганизмы.

Процедура и интерпретация

1. Подготовьте две пробирки со средой для определения аэробной и анаэробной ферментации.
2. Засейте обе пробирки исследуемым микроорганизмом.
3. Поверхность агара в одной из пробирок (для анаэробного анализа) залейте слоем стерильного жидкого парафина толщиной около 25 мм.
4. Инкубируйте пробирки при температуре 37 °C.
5. Интерпретация результатов:
   • Окислительные организмы вырабатывают кислоту в незапечатанной пробирке (при слабом росте или его отсутствии) и не вырабатывают кислоту в запечатанной пробирке.
   • Ферментативные организмы вырабатывают кислоту в обеих пробирках (и в запечатанной, и в незапечатанной).
   • Образование кислоты фиксируется по изменению цвета среды с зеленовато-синего на жёлтый по всему объёму.

Важное примечание: Пробирки с жидким парафином должны быть подвергнуты сухому стерилизационному воздействию при 160–170 °C в течение 2 часов. Влажная стерилизация под давлением для этой цели недостаточна.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 19,35 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте при частом перемешивании до кипения для полного растворения компонентов.
3. Разлейте среду по пробиркам в двух экземплярах (для аэробного и анаэробного анализа).
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
5. Охладите пробирки в вертикальном положении.

Технические характеристики

• Происхождение компонентов: животное
• Тип продукта: стандартная среда
• Физическая форма: порошок
• Материал упаковки: ПНД (HDPE)
• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от светло-жёлтого до сине-зелёного цвета
• Свойства гелеобразования: полутвердый гель (сопоставим с 0,2 % раствором агара)
• Цвет и прозрачность готовой среды: зеленовато-синий, прозрачный или слегка опалесцирующий гель
• pH водного раствора (1,94 % w/v) при 25 °C: 6,8 $\pm$ 0,2
• Диапазон pH: 6,60–7,00

Состав (г/л)

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 15–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Ограничения и меры предосторожности

• Для подтверждения результатов необходимо проведение дополнительных биохимических тестов.
• При работе с образцами следует соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности, использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица.
• Утилизация использованных сред должна осуществляться путём автоклавирования или сжигания в соответствии с лабораторными протоколами по обращению с инфекционными материалами.