HiMedia M814-500G Дифференциальная буферная среда с дрожжевым экстрактом и активированным углем

Питательная микробиологическая среда HiMedia M814-500G Дифференциальная буферная среда с дрожжевым экстрактом и активированным углем — порошковая среда для селективного выделения и дифференциации видов Legionella. Среда предназначена для анализа клинических респираторных мазков и проб воды; готовая среда имеет pH 6,9 ± 0,2 при 25 °C.

Назначение

Среда HiMedia M814-500G применяется для селективного выделения и дифференциации видов Legionella, включая Legionella pneumophila, из следующих типов образцов:

• клинические образцы — респираторные мазки;
• пробы воды.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Legionella pneumophila — грамотрицательная палочковидная бактерия, вызывающая болезнь легионеров. Инфицирование дыхательных путей происходит при вдыхании аэрозольных капель воды. В природной среде бактерия обитает в цитоплазме водного простейшего Hartmanella.

К распространённым источникам Legionella относятся:

• градирни промышленных систем охлаждения воды;
• крупные централизованные системы кондиционирования воздуха;
• системы бытового горячего водоснабжения;
• фонтаны и другие устройства-распылители, использующие воду из общественных систем водоснабжения;
• природные источники пресной воды, включая пруды и ручьи.

Первоначально для выделения L. pneumophila применяли агар F-G, разработанный Feeley и соавторами. В модифицированном составе мясной экстракт и гидролизат казеина заменили дрожжевым экстрактом, а крахмал — активированным углём. Последующее улучшение состава заключалось в добавлении буфера ACES — N-2-ацетамидо-2-аминоэтансульфоновой кислоты. Чувствительность буферизованного угольно-дрожжевого агара повысили добавлением альфа-кетоглутарата. Дифференциальная буферная среда с дрожжевым экстрактом и активированным углём для селективного выделения и дифференциации видов Legionella основана на составе Vickers и содержит два индикаторных красителя: бромкрезоловый пурпурный и бромтимоловый синий.

Функции компонентов среды:

• дрожжевой экстракт обеспечивает питательные вещества, необходимые для роста бактерий;
• пирофосфат железа, гидрохлорид L-цистеина и альфа-кетоглутарат стимулируют рост видов Legionella;
• активированный уголь нейтрализует токсичные продукты метаболизма, образующиеся в среде, и изменяет поверхностное натяжение среды;
• бромкрезоловый пурпурный и бромтимоловый синий способствуют идентификации видов Legionella по окраске и морфологии колоний;
• полимиксин B подавляет большинство грамотрицательных бацилл;
• ванкомицин подавляет рост большинства грамположительных бактерий;
• буфер ACES стабилизирует кислотно-щелочную реакцию среды.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 37,37 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов и температуре 121 °C в течение 15 мин. Давление 15 фунтов соответствует ориентировочно ≈0,10 МПа.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. При необходимости в асептических условиях добавьте 50 ЕД/мл полимиксина B и 1 мг/мл ванкомицина. Вместо этого можно асептически добавить восстановленное содержимое одного флакона FD349 — добавки V.P.
6. Тщательно перемешайте среду.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Пробоподготовка, сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте надлежащие методы обращения с материалом в соответствии с установленными руководствами.

Для проб воды используйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно руководствам и местным нормативным требованиям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяли после инкубации при 35–37 °C в течение 72–96 ч с добавлением 50 ЕД/мл полимиксина B и 1 мг/мл ванкомицина.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от светло-серого до чёрного цвета.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется серо-чёрный непрозрачный гель.

Реакция среды

Реакция водного раствора с концентрацией 3,74 % масс./об. при 25 °C:

• pH: 6,9 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,70–7,10.

Ограничения применения

1. Исследуемый образец следует высевать как можно скорее после получения. Мазки для культивирования можно непосредственно штриховать по поверхности чашки.
2. Рост Legionella обычно становится видимым через 3–4 дня, однако для появления некоторых видов может потребоваться до 2 недель.
3. Для окончательного подтверждения необходимо провести дополнительные биохимические исследования.

Предупреждения и меры предосторожности

• Среда предназначена для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Указания по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения: плотно закрытый контейнер, сухое проветриваемое помещение, защита от экстремальных температур и источников воспламенения.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия плотно закрывайте флакон и храните продукт в сухом состоянии.
• Гигроскопичность продукта может привести к образованию комков.
• Неправильное хранение также может вызвать комкование.
• После каждого использования плотно закрывайте контейнер.
• Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в течение установленного срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованного или непригодного препарата посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M814-500G
• Назначение изделия: питательная микробиологическая среда
• Форма выпуска: