Среда NNN модифицированная HiMedia M681

Элективная модифицированная среда NNN HiMedia M681 производства HiMedia для культивирования лейшманий и трипаносом. Двухфазная система предназначена для диагностической работы с простейшими семейства Trypanosomatidae в клинических образцах.

Принцип измерения

Среда NNN модифицированная представляет собой двухфазную систему, состоящую из питательного кровяного агара (Часть А) и раствора Локса (Часть B). Кровяной агар служит высокопитательным основанием, поддерживающим рост требовательных организмов, таких как Leishmania и Trypanosoma. Посев образцов производится в жидкую фазу двухфазной среды, что способствует развитию организмов, имитируя условия в организме насекомого-переносчика; при этом амастиготы трансформируются в промастиготы примерно за 24 часа.

Состав

Состав компонентов, г/л:

Методика приготовления и использования

Приготовление части А

1. Суспендируйте 31 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$ 0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C и асептически добавьте 10 % стерильной дефибринированной крови кролика или человека (предварительно инактивированной при 56 °C в течение 30 мин).
5. Тщательно перемешайте и разлейте по пробиркам по 5 мл или по колбам по 25 мл.
6. Пробирки с whoever средой следует охлаждать в наклонном положении (для формирования скоса).

Приготовление части B

1. Суспендируйте 11,2 г порошка части B в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$ 0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Добавьте примерно 2 мл в пробирки или 10–15 мл в колбы поверх застывшей среды части А.

Область применения

Среда используется для анализа клинических образцов: образцов тканей, аспиратов из очагов поражения и других биоматериалов.

Технические характеристики

Контроль качества

• Внешний вид:
  • Часть А: однородный свободнотекущий порошок от кремового до коричневого цвета.
  • Часть B: однородный свободнотекущий порошок от белого до кремового цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды:
  • Базовая среда: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
  • После добавления крови: красный непрозрачный гель.
  • Часть B: бесцветная прозрачная жидкость.
• Реакция (pH при 25 °C):
  • 3,1 % водный раствор (Часть А): 7,3 ± 0,2.
  • 1,12 % водный раствор (Часть B): 7,0 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 21–26 °C в течение 48–72 часов с добавлением стерильной дефибринированной крови кролика или человека.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом помещении, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания. Из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание комкования.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Утилизация: использованные или непригодные препараты подлежат обязательному автоклавированию и/или сжиганию. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть деконтаминированы согласно лабораторным протоколам.

Ограничения и предостережения

• Только для диагностики in vitro и профессионального использования.
• Индивидуальные организмы могут проявлять вариативность в требованиях к росту и паттернах развития на данной среде.
• Для полной идентификации возбудителя требуются дополнительные серологические и биохимические тесты.
• Работа с клиническими образцами должна проводиться с соблюдением стандартных мер предосторожности и использованием средств индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).