Среда NNN модифицированная HiMedia M681

Элективная питательная среда Среда NNN модифицированная HiMedia M681 — двухкомпонентная порошковая среда для культивирования лейшманий и трипаносом. Среда предназначена для работы с клиническими образцами, включая тканевые образцы и аспираты из очагов поражения, и применяется только для диагностики in vitro квалифицированным персоналом.

Назначение

Среда NNN модифицированная HiMedia M681 рекомендована для культивирования представителей родов Leishmania и Trypanosoma. Тип питательной среды: элективный.

Тип образца: клинические образцы — тканевые образцы, аспираты из очагов поражения и другие аналогичные материалы.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик. Экстракт HM эквивалентен мясному экстракту.

Методика приготовления

Приготовление компонента A

1. Суспендируйте 31 г компонента A в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Асептически добавьте 10 % стерильной дефибринированной кроличьей или человеческой крови, предварительно инактивированной при 56 °C в течение 30 мин.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте по 5 мл в пробирки или по 25 мл в колбы.
8. Охладите среду в пробирках в наклонном положении.

Приготовление компонента B

1. Суспендируйте 11,2 г компонента B в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Добавьте приблизительно 2 мл компонента B в пробирки или 10–15 мл в колбы поверх затвердевшей среды компонента A.

Принцип действия и интерпретация

Семейство простейших Trypanosomatidae включает представителей родов Leishmania и Trypanosoma — жгутиковых организмов, обитающих в крови и тканях человека.

Среда NNN была разработана Нови и Мак-Нилом и позднее модифицирована Николь. Среда NNN модифицированная состоит из двух фаз:

• кровяной агар — компонент A;
• раствор Локка — компонент B.

Среда представляет собой основу из кровяного агара с жидкой покровной фазой. Кровяная агаровая основа является высокопитательной средой, поддерживающей рост требовательных микроорганизмов, включая Leishmania и Trypanosoma. Исследуемые образцы вносят в жидкую фазу двухфазной среды и инкубируют. Такие условия способствуют развитию организмов, характерному для насекомого-переносчика. Примерно через 24 ч амастиготы трансформируются в промастиготы.

Модифицированная среда NNN применяется для диагностической работы. В отличие от исходной среды NNN, модифицированный вариант сочетает кровяной агар и раствор Локка в двухфазной системе.

Сбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными лабораторными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Информацию по безопасности следует получать из соответствующих паспортов безопасности.

Ограничения применения

1. Отдельные организмы различаются по требованиям к условиям роста и могут демонстрировать на среде вариабельные характеристики роста.
2. Каждая серия среды протестирована на организмы, указанные в сертификате анализа (COA). Для любого конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, пользователю рекомендуется валидировать среду с учётом собственных требований.
3. Для полной идентификации необходимы дополнительные серологические и биохимические исследования.

Рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при применении согласно указаниям на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

Внешний вид

• Компонент A: однородный, свободно пересыпающийся порошок от кремового до светло-коричневого цвета.
• Компонент B: однородный, свободно пересыпающийся порошок от белого до кремового цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Основная среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• После добавления стерильной дефибринированной кроличьей или человеческой крови: непрозрачный гель красного цвета.
• Компонент B: бесцветная прозрачная жидкость.

Реакция среды

• Компонент A: реакция водного раствора концентрацией 3,1 % (м/об.) при 25 °C; pH 7,3 ± 0,2.
• Компонент B: реакция водного раствора концентрацией 1,12 % (м/об.) при 25 °C; pH 7,0 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 21–26 °C в течение 48–72 ч с добавлением стерильной дефибринированной кроличьей или человеческой крови.

Технические характеристики

Хранение и срок годности

• Температура хранения продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения продукта: в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия плотно закрывайте флакон и храните продукт в сухом виде, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования