HiMedia M681-100G Модифицированная среда NNN (Twin Pack)

Порошковая двухкомпонентная питательная среда HiMedia M681-100G Модифицированная среда NNN (Twin Pack) предназначена для культивирования лейшманий и трипаносом; масса набора — 100 г. Среда применяется для посева клинических образцов, включая ткани и аспираты из очагов поражения, и требует приготовления двух фаз: кровяного агара и жидкого слоя раствора Локка.

Назначение

Модифицированная среда NNN рекомендована для культивирования представителей родов Leishmania и Trypanosoma. Тип образца: клинические образцы — образцы тканей, аспираты из очагов поражения и другие аналогичные материалы.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик. Компонент HM extract эквивалентен мясному экстракту.

Принцип действия и интерпретация

Семейство простейших Trypanosomatidae включает представителей родов Leishmania и Trypanosoma — жгутиковых организмов, обитающих в крови и тканях человека.

Среда NNN была разработана Novy и McNeal и позднее модифицирована Nicolle. Модифицированная среда NNN состоит из двух фаз:

• кровяного агара — часть A;
• раствора Локка — часть B.

Модификация применяется в диагностической работе и включает основу из кровяного агара с жидкой надслойной средой. Основа из кровяного агара представляет собой высокопитательную среду, поддерживающую рост требовательных микроорганизмов, включая Leishmania и Trypanosoma. Образцы вносят в жидкую фазу двухфазной среды и инкубируют. Такие условия способствуют развитию организмов, характерному для насекомого-переносчика. Примерно через 24 ч амастиготы трансформируются в промастиготы.

Методика приготовления

Приготовление части A

1. Суспендируйте 31 г части A в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C в течение 15 мин; ориентировочное давление — 0,103 МПа (15 фунтов на квадратный дюйм).
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. После предварительной инактивации при 56 °C в течение 30 мин асептически добавьте 10 % стерильной дефибринированной кроличьей или человеческой крови.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте по 5 мл в пробирки или по 25 мл в колбы.
8. Оставьте среду в пробирках для охлаждения в наклонном положении.

Приготовление части B

1. Суспендируйте 11,2 г части B в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C в течение 15 мин; ориентировочное давление — 0,103 МПа (15 фунтов на квадратный дюйм).
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Добавьте примерно 2 мл в пробирки или 10–15 мл в колбы поверх затвердевшей среды части A.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным лабораторным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики вне организма (in vitro).
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Разные микроорганизмы имеют различные требования к условиям роста и могут демонстрировать неодинаковую динамику роста на среде.
2. Каждая партия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа. Для любого конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, пользователю рекомендуется самостоятельно валидировать среду с учётом специфических требований применения.
3. Для полной идентификации необходимы дополнительные серологические и биохимические исследования.

Рабочие характеристики и оценка

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованных температурных условиях.

Контроль качества

Внешний вид

• Часть A: однородный, легко сыпучий порошок от кремового до желтовато-коричневого цвета.
• Часть B: однородный, легко сыпучий порошок от белого до кремового цвета.

Гелеобразование

Гель плотный, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Основная среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• После добавления стерильной дефибринированной кроличьей или человеческой крови: непрозрачный гель красного цвета.
• Часть B: бесцветная прозрачная жидкость.

Реакция

• Реакция 3,1 % масс./об. водного раствора части A при 25 °C: pH 7,3 ± 0,2.
• Реакция 1,12 % масс./об. водного раствора части B при 25 °C: pH 7,0 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 21–26 °C в течение 48–72 ч с добавлением стерильной дефибринированной кроличьей или человеческой крови.

Хранение и срок годности

• Температура хранения нераскрытого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения: в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия хранить продукт в сухом виде, плотно закрыв флакон, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования плотно закрывать контейнер.
• Рабочие характеристики продукта обеспечиваются при использовании в течение указанного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лаборат